藏藥川西獐牙菜揮發(fā)性化學成分及抑菌活性研究

1、<p>　　藏藥川西獐牙菜揮發(fā)性化學成分及抑菌活性研究</p><p>　　作者：張應鵬 楊云裳 劉宇 馬興銘</p><p>　　【摘要】 目的研究川西獐牙菜揮發(fā)油的化學組成及其抑菌活性。方法采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，用GC-MS進行成分分析；選擇金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、傷寒沙門氏菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為代表菌種，對揮發(fā)油的抗菌活性進行了初步研究。結(jié)果分離出88

2、種成分，鑒定出61種化合物，其峰面積相對含量約占揮發(fā)油總量的91.32%。川西獐牙菜揮發(fā)油的主要組分為二十六烷(12.88％)，二十八烷(17.83％)，1-碘-十六烷(7.27％)，11&sup2;十烷基&sup2;二十一烷(5.47％)，2&sup2;十二烷氧基-乙醇(3.04％)，2-環(huán)己基-十一烷( 2.19％)，1&sup2;碘-十八烷(3.21％)，四十四烷( 5.47％)，二十九烷(4.29

3、％)，11&sup2;十烷基-二十一烷(5.47％)，三十烷( 3.17％) 等。結(jié)論川西獐芽菜揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和傷寒沙門氏菌有抑菌活性。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 川西獐牙菜 揮發(fā)油 氣相色譜-質(zhì)譜 抑菌活性</p><p>　　川西獐牙菜Swertia mussotii Franch，龍膽科獐牙菜屬,一年生草本,高15～60 cm，主根黃色，生于海拔

4、3 600～3 800 m 的山坡、灌叢草地、林緣、河灘等［1］，在我國四川的西部,西藏及甘肅的海西、海北、黃南、玉樹、果洛等地區(qū)均有分布。川西獐芽菜也稱為藏茵陳, 是特種藏藥, 用于治療消化不良、膽囊炎、各型肝炎、急性骨髓炎、急性結(jié)膜炎、急性咽喉炎及燙傷, 也用于風火牙痛、熱淋等癥［2，3］ 。目前對獐牙菜屬的藥理和化學性質(zhì)的研究已有諸多報道［4］。但是，川西獐牙菜揮發(fā)性化學成分尚未見文獻報道，筆者在研究印度獐牙菜揮發(fā)性化學成分的基礎(chǔ)

5、上［5］，繼續(xù)對川西獐牙菜的揮發(fā)性化學成分和抑菌活性加以研究。</p><p><b>　　1 器材</b></p><p>　　1.1 藥材 川西獐芽菜，2003&sup2;11購買自青海湟中藏醫(yī)院，植物標本由蘭州大學生命科學院張國梁教授鑒定，植物標本現(xiàn)存放于蘭州理工大學石油化工學院有機與藥物化學研究室。</p><p>　　1.

6、2 試劑與菌株MH 瓊脂、MH 肉湯、平板菌落計數(shù)瓊脂: 杭州微生物試劑廠；細菌菌株：金黃色葡萄球菌CMCC(B) ATCC25923，大腸埃希菌CMCC(B) ATCC25922：枯草芽孢桿菌O901，銅綠假單胞菌ATCC27853，傷寒沙門氏菌ATCC6539，蘭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫學教研室提供。所用試劑均為分析純。</p><p>　　1.3 儀器HP6890-5973GC/MS聯(lián)用儀(美國惠普公司);

7、 氣相色譜條件：色譜柱為SE-54（30 m×0.25 mm,33.0 μm）；柱溫為40℃，以5℃·min-1的速率升至260℃，保持40 min;進樣口溫度為260℃；載氣為He氣，流速為0.3 ml·min-1；進樣量為0.2 μl，分流比為50∶1。質(zhì)譜條件：離子源為EI，電子能量為70 eV,接口溫度為280℃，質(zhì)量范圍為1～550 amu，溶劑延遲0 min。</p><p&

8、gt;<b>　　2 方法與結(jié)果</b></p><p>　　2.1 揮發(fā)油的提取取川西獐牙菜干燥全草50 g粉碎，加入200 ml蒸餾水進行水蒸氣蒸餾8 h，收集餾出液700 ml。 萃取時，加入50 g氯化鈉，以減少揮發(fā)性成分在水中的溶解度，用乙醚萃取餾出液6次，合并乙醚萃取液，用無水硫酸鈉干燥萃取液1 h，在30℃條件下回收乙醚，得到淺黃色油狀物, 提取液具有特殊芳香氣味，密封保存

9、，供分析用。</p><p>　　2.2 成分鑒定在上述色譜條件下進樣，得到黃花補血草揮發(fā)油的總離子流圖(見圖1)。啟動HP689OMS化學工作站，檢索NIST 98譜圖庫，結(jié)合有關(guān)文獻人工檢索確定其化學組成［6］（見表1）。另外，通過與正烷烴化合物的保留時間比較，采用線性插入的方法計算各化合物在揮發(fā)油中的百分含量。</p><p>　　各成分的保留指數(shù)，與文獻［7，8］化合物的保留指數(shù)

10、進行比較，進一步確證各化合物。按峰面積歸一化法計算各化合物在揮發(fā)油中的百分含量，具體分析結(jié)果見表1。</p><p>　　2.3 抗菌活性分析［9］</p><p>　　2.3.1 菌液制備取實驗菌株接種于MH瓊脂平板培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)14 h，用MH液體培養(yǎng)基制備菌懸液，菌液濃度1.5×108CFU·ml-1備用。</p><p>　　2

11、.3.2 含藥物紙片制備將藥物溶解后，滅菌備用。每張紙片（直徑6 mm）加藥物樣品10 μl，陰性對照是助溶劑，空白對照生理鹽水；陽性對照是慶大霉素溶液。</p><p>　　2.3.3 K－B法取菌液濃度為1.5×108 CFU·ml-1的菌株0.2 ml，均勻涂布整塊MH瓊脂培養(yǎng)基表面，室溫2～5 min后，貼加含藥紙片，置入35℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～18 h，精確測定其紙片周圍抑菌環(huán)

12、直徑的大小，結(jié)果以毫米（mm）表示。見表2。</p><p>　　2.3.4 揮發(fā)油濃度助溶劑為DMSO，濃度Ⅰ：10 mg/ml； 濃度Ⅱ：22 mg/ml； 濃度Ⅲ：46 mg/ml。</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　通過GC/MS分析,從川西獐牙菜揮發(fā)油中共分離出88個化合物,鑒定了其中61個，占化合

13、物總數(shù)的51.1%，所鑒定的化合物含量占全揮發(fā)油的82.12%。分析鑒定結(jié)果表明，川西獐牙菜揮發(fā)油的主要組分為烷烴，分別為二十六烷(12.88％)，二十八烷(17.83％)，1-碘-十六烷(7.27％)，11-十烷基-二十一烷(5.47％)，2-十二烷氧基-乙醇(3.04％)，2-環(huán)己基-十一烷( 2.19％)，1-碘-十八烷(3.21％)，四十四烷( 5.47％)，二十九烷(4.29％)，11-十烷基-二十一烷(5.47％)，三十烷(

14、3.17％) 等。揮發(fā)油濃度為46 mg·ml-1時，對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和傷寒沙門氏菌有抑菌活性。</p><p>　　表1 川西獐牙菜揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜法分析結(jié)果（略）</p><p>　　圖1 川西獐牙菜揮發(fā)油GC/MS分析總離子流圖（略）</p><p>　　表2 川西獐牙菜揮發(fā)油抑菌實驗結(jié)果（略）</p><p

15、><b>　　【參考文獻】</b></p><p>　?。?］ 江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典［M］.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1995：1589.</p><p>　?。?］ 鄒寒雁，周翰信.青海中藥資源開發(fā)及利用研究［M］.北京：東方出版社，1990：40.</p><p>　?。?］ 中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志，第4冊［M］.北京：

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17、tial oil components by gas chromatography mass spectroscopy［M］.vol 1. ed 3. Ilinois: Alured Publishing Corporation, 2001：165.</p><p>　　［7］ 叢浦珠，蘇克曼.分析化學手冊, 第9分冊：質(zhì)譜分冊［M］.北京:化學工業(yè)出版社, 2000:136.</p><p&

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