血小板衍生生長因子受體在膀胱癌中的表達意義

1、<p>　　血小板衍生生長因子受體在膀胱癌中的表達意義</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 膀胱腫瘤 </p><p>　　關(guān)鍵詞 :膀胱腫瘤;受體，血小板源生長因子;新生血管化，病理性;免疫組織化學 </p><p>　　摘 要:目的 探討血小板衍生生長因子受體（PDGFR）表達與膀胱移行上皮細胞癌發(fā)生、生物學行為及預后的關(guān)系. 方法 采用免疫組織化學

2、技術(shù)――兩步法檢測68例膀胱移行細胞癌和10例正常膀胱組織PDGFR表達及膀胱癌組織中微血管密度（MVD）. 結(jié)果 PDGFR陽性染色分布于癌細胞、間質(zhì)、血管及炎癥細胞的胞質(zhì)及胞膜.膀胱癌組織PDGFR陽性率為83.8%，明顯高于正常膀胱組織（30.0%，P&lt;0.01），膀胱癌組織中PDGFR陽性表達組的微血管密度（MVD）明顯高于PDGFR陰性表達組（85±30vs36±15，P&lt;0.

3、01）. 結(jié)論 PDGFR表達與正常膀胱組織生長有關(guān)，過度表達與癌的形成、血管的形成及炎癥細胞功能相關(guān)，未發(fā)現(xiàn)PDGFR表達與腫瘤分期、分級及預后相關(guān). </p><p>　　Keywords:bladder neoplasms;receptors，platelet-dervied growth factor;neovascularization，pathologic;im-munohistochemistry

4、 </p><p>　　Abstract:AIM To study the relationship between expres-sion of platelet-derived growth factor receptor（PDGFR）and the genesis，biological behavior and prognosis of bladder transitional cell carcinoma

5、.METHODS Expression of PDGFR and microvessel density（MVD）were investigated in68cases of transitional cell carcinoma in bladder and10cases of normal bladder tissues with immunohistochemical </p><p>　　techniqu

6、e according to the procedures of classical two-steps.RESULTS It was revealed that the PDGFR positive staining rate in tumor tissues（83.8%，57/68）was significantly higher（P&lt;0.01）than that in normal tissues（30%，3/10）

7、;the pos-itive staining was confined to the cytoplasms and membranes of epithelial，interstitial，vascular smooth muscle and inflam-matory cells.MVD was higher in the positive expression of PDGFR than in the negative patie

8、nts（85±30vs36±15，P&lt;0.01）.CONCLUSION Expression of PDG</p><p><b>　　0 引言 </b></p><p>　　血小板衍生生長因子（PDGF）是細胞生存微環(huán)境中的重要一員［1-3］ .研究表明，其受體（PDGFR）表達失調(diào)可導致細胞增殖及惡變［4-7］ .PDGFR在膀胱

9、腫瘤表達的研究較少且關(guān)系尚未明確.我們采用免疫組織化學技術(shù)――兩步法，在檢測膀胱移行上皮細胞癌組織中PDGFR表達的同時用VWF一抗檢測腫瘤的微血管密度（MVD），探討PDGFR表達與膀胱移行細胞癌發(fā)生、生物學行為及預后的關(guān)系. </p><p><b>　　1 材料和方法 </b></p><p><b>　　1.1 材料 </b><

10、/p><p>　　1988/1993我院經(jīng)病理證實的膀胱移行細胞癌石蠟包埋標本68例，均有完整的5a隨訪資料.其中男49例，女19例，年齡25～82（平均60.2）歲.臨床病理與分期按UICC標準:Tis～T1 36例，T2 ～T 4 32例.按WHO腫瘤分級:Ⅰ級16例，Ⅱ級29例;Ⅲ級23例;復發(fā)、死亡43例（死亡26例，17例復發(fā)存活）.另取10例正常膀胱組織作對照.常規(guī)切片厚度4μm.兔抗人PDGFR多克隆抗

11、體由Santa Cruz公司提供，工作濃度1∶100.鼠抗人VWF mAb由Dako公司提供，工作濃度1∶200.抗兔、鼠二抗（Dako Envision TM +system，HRP R ）由Dako公司提供. 1.2 方法 用免疫組織化學兩步法.作4μm厚連續(xù)組織切片4張，分別做PDGFR，VWF免疫組化，空白對照和HE染色.常規(guī)脫蠟至水，30mL&#12539;L-1 H2 O2 封閉30min，1g&#1253

12、9;L-1 胰蛋白酶消化30min，滴加一抗4℃過夜，37℃孵育1h，PBS液震洗后滴加二抗并37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木素復染、脫水、二甲苯透明，封固閱片.用已知</p><p>　　微血管密度的計數(shù):按Weidner法［8］ 在低倍鏡下找到腫瘤組織的微血管區(qū)（呈陽性染色的內(nèi)皮細胞），再在高倍鏡（20×10）觀察單位面積癌組織的微血管數(shù)量，以5個高倍視野微血管數(shù)的均數(shù)表示. </p&g

13、t;<p>　　統(tǒng)計學處理:結(jié)果采用χ2 檢驗，t檢驗及Spear-man秩相關(guān)分析. </p><p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p>　　2.1 PDGFR陽性染色分布及染色結(jié)果 </p><p>　　細胞呈棕黃色顆粒狀或線網(wǎng)狀陽性染色分布于胞質(zhì)、胞膜（Fig1）.膀胱癌組中癌細胞、血管平滑肌、間質(zhì)細胞及部

14、分炎癥細胞均有陽性細胞染色.正常膀胱組織中陽性染色多見于上皮細胞，其次為血管平滑肌細胞.膀胱癌組的PDGFR染色陽性率及強陽性率均明顯高于正常膀胱組（P&lt;0.01和P&lt;0.05，Tab1）.表1 膀胱癌組織中PDGFR染色結(jié)果（略） </p><p>　　2.2 腫瘤分期分級與PDGFR表達的關(guān)系 PDGFR陽性染色與膀胱癌分期、分級間無相關(guān)，即癌組織中PDGFR表達并不隨著腫瘤的分

15、期、分級遞增而遞增（Tab2）.表2 膀胱癌分期分級與PDGFR表達的關(guān)系（略） </p><p>　　2.3 PDGFR表達與腫瘤微血管密度及膀胱癌預后的關(guān)系 </p><p>　　PDGFR表達與膀胱腫瘤組織MVD之間相關(guān)，即PDGFR陽性表達組腫瘤組織MVD（85±30，n=57）明顯高于PDGFR陰性表達組（36±15，n=11，P&lt;0.01）

16、.膀胱移行上皮細胞癌68例中，PDGFR表達陽性57例，陰性11例，生存滿5a者分別為32，6例，兩組5a生存率無顯著差異.PDGFR強陽性表達34例，弱表達或不表達34例，生存滿5a者分別為20，18例，兩組5a生存率亦無顯著性差異. </p><p><b>　　3 討論 </b></p><p>　　血小板衍生生長因子（PDGF）可來源于血小板、巨噬細胞、成纖維

17、細胞等細胞，是重要的間葉組織細胞生長調(diào)節(jié)因子，與其受體結(jié)合后可激活與細胞增殖有關(guān)的酶及基因，并可調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的合成及分解［9-11］ .Fudge等［12］ 觀察到PDGF-A鏈及PDGFR-α表達于前列腺癌上皮、基質(zhì)細胞.Alpers等［13］ 亦發(fā)現(xiàn)PDGFR可表達于Wilms腫瘤的上皮細胞.PDGF系統(tǒng)可調(diào)節(jié)多種正常組織的生長發(fā)育［14-17］ .我們發(fā)現(xiàn)正常膀胱組織有30%具有PDGFR表達，提示PDGF系統(tǒng)可調(diào)控正常組織的生

18、長及功能的維持.我們同時發(fā)現(xiàn)PDGFR表達于正常移行上皮細胞、膀胱癌細胞、血管平滑肌細胞及其他一些間質(zhì)細胞，表明PDGF可調(diào)控膀胱組織多種細胞的生長及增殖.目前的研究發(fā)現(xiàn)PDGFR高表達與多種腫瘤生成密切相關(guān).Sitaras等［18］ 發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)前列腺癌細胞株可以分泌PDGF，表達PDGFR.Michel等［19］ 亦發(fā)現(xiàn)人類前列腺細胞惡性增殖受PDGF調(diào)節(jié).Fudge等［12］ 觀察到PDGF及其受體的抗體可標記于前列腺癌細胞.Co

19、ltrera等［20］ 和Fudge等［12］ 檢測到某些</p><p>　　stimulated NIH3T3fibroblasts［J］.Exp Cell Res，1999;248（2）:531-537. </p><p>　?。?1］DeMali KA，Balciunaite E，Kazlauskas A.Integrins enhance platelet-derived gr

20、owth factor（PDGF）-dependent responses by altering the signal relay enzymes that are recruited to the PDGF beta receptor［J］.J Biol Chem，1999;274（28）:19551-19558. </p><p>　?。?2］Fudge K，Wang CY，Stearns ME.Immu

21、nohistochemistry anal-ysis of platelet-derived growth factor A and B chains and platelet-derived growth factor alpha and beta receptor expres-sion in benign prostatic hyperplasias and Gleason-graded human prostate adenoc

22、arcinomas［J］.Mod Pathol，1994;7（6）:549-559. </p><p>　　［13］Alpers CE，Hudkins KL，F(xiàn)erguson M，Johnson RJ，Rutledge JC.Platelet-derived growth factor A-chain expression in devel-oping and mature human kidneys and

23、in Wilms’tumor［J］.Kid-ney Int，1995;48（1）:146-154. </p><p>　　［14］Dong ML，Chen B，Li YL，Liu J，Gu FY.Effect of PDGF-AB on the ultrastucture of cultured fibroblasts［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med U

24、niv），1998;19（6）:633-635. </p><p>　?。?5］Ren YS，Chen Q，Jia GL，Jin Y，Dong SZ.Expression ofβrecep-tor of platelet derived growth factor in human coronary artery ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Uni

25、v），1998;19（6）:652-654. </p><p>　　［16］Dong ML，Chen B，Jia CY，Tang CW，Cao YX.The effect of platelet-derived growth factor-AB on cell cycle and DNA syn-thesis of fibroblasts［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth

26、 Mil Med Univ），1999;20（11）:1016-1018. </p><p>　?。?7］Dong ML，Chen B，Su YJ，Li YL，Tang CW.Effect of PDGF-AB on proliferation of fibroblasts and contraction of fibroblast-populated collagen lattice［J］.Di-si Jun

27、yi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1998;19（3）:343-344. </p><p>　　［18］Sitaras NM，Sariban E，Bravo M，Pantazis P，Antoniades HN.Constitutive production of platelet-derived growth factor-like proteins by huma

28、n prostate carcinoma cell lines［J］.Cancer Res，1988;48（7）:1930-1935. </p><p>　?。?9］Michel P，Van Velthoven R，Petein M，Gras S，Etievant C，Pasteels JL，Kiss R.Influence of suramin alone or in combina-tion with DH

29、T and PDGF on the cell proliferation of benign and malignant human prostatic tissues in organ cultures［J］.Anti-cancer Res，1991;11（11）:2075-2078. </p><p>　?。?0］Coltrera MD，Wang J，Porter PL，Gown AM.Expression

30、 of platelet-derived growth factor B-chain and the platelet-derived growth factor receptor beta subunit in human breast tissue and breast carcinoma［J］.Cancer Res，1995;55（12）:2703-2708. </p><p>　?。?1］Oikawa

31、T.Control of tumor-related angiogenesis ［J］.Hum Cell，1998;11（4）:201-206. </p><p>　?。?2］O’Byme KJ，Dalgleish AG，Browning MJ，Steward WP，Harris AL.The relationship between angiogenesis and the immune re-sponse