凡納濱對蝦促雄性腺結構及其性別分化的研究.pdf

1、凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)雌雄之間的某些生物學或經(jīng)濟學性狀(如生長速度、個體大小等)存在顯著差異，性成熟后個體大小相差懸殊。若實現(xiàn)他們的單性化養(yǎng)殖，則可以縮短養(yǎng)殖周期，提高產(chǎn)量。因此深入開展凡納濱對蝦性別決定因子及其性別決定機制的研究是十分必要的。本文利用生化技術和組織學手段等，研究了凡納濱對蝦促雄性腺的結構及其性別分化時期：檢測了眼柄粗提物的GIH(Gonad-inhibiting Hormone)活性；并

2、且采用不同濃度的眼柄粗提物對不同時期的凡納濱對蝦仔蝦進行了浸泡處理，獲得了雌性比例較高的群體。為凡納濱對蝦性別決定機制的研究提供了基礎材料，表明了通過性別控制實現(xiàn)凡納濱對蝦單性化養(yǎng)殖的可能性。 利用顯微觀察和組織學連續(xù)切片的方法研究發(fā)現(xiàn)：凡納濱對蝦的促雄性腺埋于精莢囊端壺腹外側的肌肉中，呈不規(guī)則的片狀，用Harris蘇木精染色，整體被染成深藍色。組織切片觀察發(fā)現(xiàn)：體長為7em左右的凡納濱對蝦雄蝦的促雄性腺細胞多為卵圓形，分散排列

3、在肌肉中，細胞核比較大，但是核質疏松，被染成淺藍色，核仁1～2個清晰可見，細胞界限較清晰；體長為9cm左右的凡納濱對蝦雄蝦的促雄性腺，有兩種形態(tài)的細胞：一種核質致密嗜堿性非常強，細胞核被染成深藍色，核仁很難辨認，大多呈圓形或卵圓形；另一種細胞與體長為7cm的結構相似，細胞核內(nèi)的電子密度比7cm的多，兩種細胞的數(shù)量相差不多；體長為12cm左右的凡納濱對蝦促雄性腺，成團狀排列在精莢囊的一側，各個細胞團大小形狀不一，每個細胞團外面都有一層很薄

4、的結締組織，第一種類型細胞居多；體長為15cm左右繁殖過后的凡納濱對蝦的促雄性腺，大多數(shù)腺體細胞的細胞核固縮，細胞質呈空泡狀?？梢姶傩坌韵俚慕Y構是逐步發(fā)育的，而且它的結構也會隨著精巢的發(fā)育而有所不同。 對性腺未成熟且剪掉單側眼柄的雌蝦注射不同濃度(0.001、0.01、0.1、1個眼柄/ml)的眼柄粗提物，每次注射0.2～0.3ml，每隔一天注射一次。在注射三次后的第三天，將蝦體解剖取出卵巢，在倒置顯微鏡下觀察各組卵巢卵母細胞的

5、直徑。經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)：濃度為0.001個眼柄/ml的實驗組卵巢卵母細胞的直徑顯著小于對照組(只剪單側眼柄，不注射)(0.010.05)。四個實驗組卵巢卵母細胞的直徑皆小于空白組，濃度為0.001個眼柄/ml的實驗組

6、以外，其余三個實驗組與空白組比較卵巢卵母細胞直徑的差異均達到顯著水平(P<0.05)。這說明：注射引起的蝦體損傷對卵巢發(fā)育有一定的影響，但是影響不大，凡納濱對蝦眼柄粗提物具有GIH活性。 通過組織學連續(xù)切片與掃描電鏡相結合的方法，對凡納濱對蝦早期的性別分化進行了觀察和研究。發(fā)現(xiàn)：凡納濱對蝦外部形態(tài)的性別分化最早發(fā)生在仔蝦后第37天，此時在掃描電鏡下可以觀察到雄性附肢的芽基，第45天光鏡下可以觀察到交接器；仔蝦后24天出現(xiàn)原始生殖

7、細胞(PGCS)，位于背大動脈的兩側以及圍心腔膜的腹面，細胞個體以及細胞核明顯比周圍的細胞大，具有強嗜堿性，細胞核為圓形或橢圓形，核內(nèi)染色質清晰可見，隨著生殖腺的發(fā)育，在第43天出現(xiàn)了生殖管，第55天生殖腺可以區(qū)分為精巢和卵巢。 分別在凡納濱對蝦仔蝦后17d、22d和27d，利用不同濃度(0.0001、0.01、0.1、1個眼柄/ml)的眼柄提取物，對凡納濱對蝦仔蝦進行24h的浸泡，同時在處理次數(shù)上設置梯度，每隔五天浸泡一次，分

8、一到三次不等。被浸泡過的凡納濱對蝦養(yǎng)到一定規(guī)格后，統(tǒng)計實驗組和對照組群體雌雄性別比例。發(fā)現(xiàn)對照組雌雄比例約為1:1；在仔蝦后17d處理的，除了濃度為0.001個眼柄/ml的實驗組雌性率達到80％外，其余三個實驗組雌性率均在70％～72％之間；在仔蝦后22d處理的，除了濃度為0.001個眼柄/ml的實驗組雌性率為75％以外，其余三個濃度組都在70％左右；在27d處理的，除了濃度為0.1個眼柄/ml的雌性率為73％以外，其他三組雌性率都在6