甘藍(lán)EST-SSR標(biāo)記開發(fā)及應(yīng)用.pdf

1、結(jié)球甘藍(lán)（Brassica oleracea var.capitata L.）（以下簡稱甘藍(lán)）是十分重要的十字花科蕓薹屬蔬菜作物，在我國蔬菜周年供應(yīng)和出口貿(mào)易中處于重要地位。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)在遺傳圖譜繪制、重要農(nóng)藝性狀基因定位、生物遺傳多樣性分析、遺傳進(jìn)化分析、品種鑒定等方面得到廣泛應(yīng)用。其中，簡單重復(fù)序列(Simple sequence repeat，SSR)標(biāo)記技術(shù)因多態(tài)性高，易檢測，共顯性和特異性明顯等特點(diǎn)應(yīng)

2、用更加普遍。鑒于已公開報道可用的甘藍(lán)SSR標(biāo)記數(shù)量較少，本研究基于NCBI數(shù)據(jù)庫公開報道的62，576條與甘藍(lán)相關(guān)的EST，研究開發(fā)了EST-SSR標(biāo)記，并將其應(yīng)用于甘藍(lán)指紋圖譜構(gòu)建、雜交種純度鑒定、與甘藍(lán)顯性雄性不育基因連鎖的分子標(biāo)記等。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、甘藍(lán)EST-SSR特征及擴(kuò)增分析。利用SSRIT在線分析軟件（http://www.gramene.org/db/searches/ssrtool）對19，611

3、條無冗余甘藍(lán)EST進(jìn)行了搜索，共得到1，219條SSR，分布在1，176條EST上，分布密度為1/11.48kb，包括273種重復(fù)基元。其中，二核苷酸（353個SSR）和三核苷酸(423個SSR)占主導(dǎo)地位;出現(xiàn)最多的重復(fù)基元是AG/CT，占總數(shù)的25.59％，其次為AAG/CTT占7.71％;其它重復(fù)類型所占比例均不足5％?；?，176條含有SSR的EST，設(shè)計合成了978對甘藍(lán)EST-SSR引物。以早熟圓球型甘藍(lán)397和晚熟扁圓球

4、型甘藍(lán)20-2-5兩份自交系為試材，對合成引物進(jìn)行初步的擴(kuò)增分析，其中897對引物有擴(kuò)增產(chǎn)物，共擴(kuò)增出1，026條擴(kuò)增帶;128對引物在兩份材料間表現(xiàn)出多態(tài)性，共擴(kuò)增258條多態(tài)性帶（占總帶數(shù)的25.15％）。表明開發(fā)的EST-SSR引物在甘藍(lán)上有較好的可用性。
　　 2、構(gòu)建了部分甘藍(lán)品種的指紋圖譜并進(jìn)行“京豐1號”的純度鑒定。在對甘藍(lán)EST-SSR初步擴(kuò)增分析的基礎(chǔ)上，利用BoE002、BoE222、BoE225和BoE91

5、6等4對引物構(gòu)建了“中甘11”、“8398”、“中甘15”和“中甘21”等4個春甘藍(lán)及其親本的EST-SSR指紋圖譜;利用BoE974、BoE916、BoE337、BoE316和BoE222等5對引物構(gòu)建了“京豐1號”、“晚豐”、“中甘8號”、“中甘18”、“中甘19”和“中甘22”等6個秋甘藍(lán)及其親本的EST-SSR指紋圖譜。利用能夠擴(kuò)增出互補(bǔ)帶型的標(biāo)記BoE222進(jìn)行“京豐1號”雜交種的分子鑒定，種子純度鑒定為90％，與田間鑒定結(jié)果

6、吻合率約為98％。
　　 3、獲得了與早熟圓球型甘藍(lán)顯性雄性不育基因CDMs399-3連鎖的分子標(biāo)記。以來自早熟圓球甘藍(lán)397育性分離群體的5株可育株及4株純合不育株分別構(gòu)建可育池和不育池，并以該群體的敏感不育單株自交得到的73株F2分離群體的植株為試材，篩選與早熟圓球甘藍(lán)顯性雄性不育基因連鎖的標(biāo)記，結(jié)果得到共顯性標(biāo)記BoE332（不育片段約270bp，可育片段約290bp），該標(biāo)記與顯性雄性不育基因CDMs399-3連鎖距離為