海南微藻種質(zhì)資源收集、鑒定及高含油量微藻的篩選.pdf

1、隨著礦物能源消耗和全球氣候問(wèn)題的日益嚴(yán)重,研究、開(kāi)發(fā)和利用可再生能源是人類社會(huì)、經(jīng)濟(jì)發(fā)展的大勢(shì)所趨。生物質(zhì)能作為可再生能源的重要組成部分,越來(lái)越受到世界各國(guó)的重視。微藻是一種具有光合作用效率高、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)、油脂含量高、生物量大、生長(zhǎng)周期短、易培養(yǎng)等眾多優(yōu)點(diǎn)的新型生物質(zhì)能源。海南省全年暖熱,雨量充沛,水域資源豐富,海域廣闊,藻類資源極為豐富,具有很大的潛在價(jià)值。本研究旨在通過(guò)試驗(yàn),收集得到一些海南特有的藻類資源,以豐富我國(guó)的藻類資源,

2、建立一套篩選有較大研究?jī)r(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值微藻的有效方法,并篩選高生物量、含油量藻株,建立能源微藻核心種質(zhì)資源。為藻類的開(kāi)發(fā)利用、生物質(zhì)能源的深入研究奠定基礎(chǔ)。
　　 采用水滴法、稀釋法、平板法等3種微藻的分離方法,對(duì)11個(gè)采樣點(diǎn)的樣品進(jìn)行藻株的分離、純化,得到87株微藻,其中海水藻34株,淡水藻53株。并對(duì)分離得到的部分微藻進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定,初步鑒定了盤星藻(Pediastrum biraditum)、二形柵藻(Scenedesm

3、us dimorphus)、小空星藻(Coelastrum microporum)等10余個(gè)不同的藻種。對(duì)編號(hào)DWZ-8的藻株進(jìn)行了較深入的研究,發(fā)現(xiàn)DWZ-8以似親孢子生殖方式繁殖,葉綠體分裂方式屬于獨(dú)特的劈裂式分裂,僅有一個(gè)1.4-2.1μm的蛋白核,類囊體呈管狀,方向多樣,有平行與切面的也有垂直與切面的。采用分子生物學(xué)的方法對(duì)其進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)DWZ-8核編碼的18S rDNA長(zhǎng)2500個(gè)堿基對(duì),含有兩個(gè)GI內(nèi)含子,其葉綠體編碼的16

4、S rDNA長(zhǎng)1488 bp,無(wú)內(nèi)含子;與親緣關(guān)系較近的藻種進(jìn)行比較,差異均較大。綜合分析DWZ-8各方面的鑒定指標(biāo)均與海南橡膠藻(Heveochlorella hainangensis)最為接近,筆者初步認(rèn)為DWZ-8為橡膠藻屬的一個(gè)新種(Heveochlorella species)。
　　 本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)與微藻材料Hhw中中性脂尼羅紅染色的熒光強(qiáng)度測(cè)定相關(guān)的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行梯度試驗(yàn)。得到尼羅紅熒光分光光度法測(cè)脂的最優(yōu)條件為:EX

5、485nm、微藻細(xì)胞密度OD690=0.858、DMSO的加入量250μl/ml、染色2min、NR=I.2μg/ml。采用該優(yōu)化條件對(duì)其他微藻進(jìn)行染色測(cè)定其中性脂含量均可行。
　　 通過(guò)試驗(yàn)比較得到了一種適合實(shí)驗(yàn)室使用的從微藻中快速提取粗脂肪的方法,即改良的酸水解法。同時(shí)建立了利用尼羅紅染色顯微觀察與直接提取法相結(jié)合的篩選高含油量微藻的平臺(tái),并篩選得到一些含油量較高的藻株。
　　 對(duì)2個(gè)藻株的脂肪酸成分進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),橡