熱帶富油微藻的篩選及Pepc2基因的沉默對微藻含油量的影響.pdf

1、微藻通常是指含有葉綠素α并能進行光合作用的微生物(包括藍細菌Cyanobacteria)。微藻作為一種新型的生物柴油原料,具有來源廣泛、成本低廉、清潔可再生等優(yōu)點,應(yīng)用前景極為可觀。篩選富油藻種、探索最佳培養(yǎng)條件以及利用生物技術(shù)獲取高油脂基因工程微藻已成為國際普遍關(guān)注的研究課題。
　　 熱帶地區(qū)豐富的藻種資源為篩選大量富油微藻提供了可能性,本實驗分離純化了71株熱帶水域微藻藻株,并通過形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法,對部分藻株進

2、行了種屬分類,為進一步對富油微藻進行生理生化分析、分子生物學(xué)及遺傳學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 本實驗通過尼羅紅熒光染色的方法對微藻油脂進行定性及定量分析。優(yōu)化了尼羅紅熒光染色條件:尼羅紅染料濃度0.5μg/ml、待測藻液濃度0D490=0.1-1.0、DMSO濃度20％以及染色時間10min。并為高通量篩選富油微藻提供了快速、靈敏、便捷的實驗方法。
　　 檢測了3種小球藻在四種不同培養(yǎng)基(SE、BG11、TAP、DS-1)

3、培養(yǎng)條件下的生長及油脂積累情況。結(jié)果表明,TAP培養(yǎng)基更適合小球藻的高密度培養(yǎng),而DS培養(yǎng)基則更適合小球藻油脂的累積;并篩選到油脂積累較為理想的藻種Y-019。并制作了60L管狀光生物反應(yīng)器用于微藻的擴大化培養(yǎng)。
　　 克隆了影響油脂合成代謝的關(guān)鍵基因Pepc2的部分片段,構(gòu)建了Pepc2基因的RNAi表達載體,并通過玻璃珠法轉(zhuǎn)化受體藻株萊茵衣藻Chlamydomonasreinhardtii(CC-124 wi1d type