大豆子葉節(jié)再生體系的優(yōu)化及轉(zhuǎn)EPSPS基因的研究.pdf

1、大豆子葉節(jié)再生體系大豆子葉節(jié)再生體系的優(yōu)化及優(yōu)化及轉(zhuǎn)EPSPS基因的研究研究OptimizationofRegenerationSystemviaCotyledonaryNodeTransfmationofEPSPSGeneinSoybean學科專業(yè)：遺傳學研究生：王偉指導教師：王罡教授天津大學農(nóng)業(yè)與生物工程學院二零一二年五月摘要利用基因工程技術將抗草甘膦基因?qū)氪蠖怪芯哂兄匾慕?jīng)濟意義，草甘磷的廣泛使用使克隆草甘磷抗性基因、培育抗草甘

2、磷轉(zhuǎn)基因作物成為研究熱點。大豆是公認的難轉(zhuǎn)化的作物之一，其遺傳轉(zhuǎn)化體系還不完善，較低的轉(zhuǎn)化效率限制了大豆功能基因組的研究和轉(zhuǎn)基因大豆新品種研發(fā)，所以探索建立一套高效的轉(zhuǎn)化途徑對于大豆遺傳轉(zhuǎn)化有著重要的意義。本研究在優(yōu)化大豆子葉節(jié)再生體系研究中，篩選出了再生能力強的大豆基因型黑農(nóng)37、黑農(nóng)35、合豐35、合豐25；5d苗齡的大豆子葉節(jié)再生能力較其他苗齡好；向發(fā)芽培養(yǎng)基中添加1～2mgL的6BA，不定芽誘導效果好；不定芽誘導培養(yǎng)時加入1.6

3、mgL6BA最有利于不定芽的誘導；生根培養(yǎng)中IBA的濃度為0.5～1.0mgL時，不定根誘導效果好。通過對合豐35和黑農(nóng)37的草甘膦除草劑抗性實驗，確定了合豐35和黑農(nóng)37篩選劑草甘膦濃度分別為5～7mgL和7～9mgL；抑菌劑頭孢霉素的有效抑菌濃度為500mgL。在優(yōu)化農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化體系中，確定了光下共培養(yǎng)3d有利于抗性不定芽的形成；共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加抗氧化劑為400mgLLcys和154.2mgLDTT；伸長培養(yǎng)過程中，合豐35和

4、黑農(nóng)37伸長培養(yǎng)基中ZT濃度分別為0.5mgL和1.0mgL。通過草甘膦除草劑的噴灑和涂抹實驗，確定了黑農(nóng)37和合豐35再生植株的抗性鑒定濃度。最后，建立了一個穩(wěn)定可行的農(nóng)桿菌介導子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系，并通過此遺傳轉(zhuǎn)化體系將EPSPS基因?qū)氪蠖怪?，得到?jīng)過草甘膦抗性和PCR擴增鑒定的陽性再生植株。目前，已獲得11株PCR陽性及草甘膦抗性再生植株，合豐35為6株、黑農(nóng)37為5株，均已結(jié)實。關鍵詞關鍵詞：大豆子葉節(jié)再生EPSPS基因遺傳轉(zhuǎn)化