食品科學(xué)與工程畢業(yè)論文石油烴降解菌的篩選

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p><b>　　石油烴降解菌的篩選</b></p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 食品科學(xué)與工程 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄<

3、;/b></p><p>　　摘要·······························&#

4、183;····································

5、····························1</p><p>　　ABSTRACT···&#

6、183;····································

7、····································

8、3;·········2</p><p><b>　　1 前言3</b></p><p>　　1.1 土壤石油污染的來源3</p><p>　　1.2 石油污染物對土壤的危害3</p><p>　　1.3 石油污染物的修復(fù)4

9、</p><p>　　1.4 微生物降解石油烴的研究4</p><p>　　2 實驗材料、主要儀器與試劑5</p><p>　　2.1 實驗材料5</p><p>　　2.2 主要儀器5</p><p>　　2.3 主要試劑5</p><p><b>　　2.4 培養(yǎng)基6&

10、lt;/b></p><p><b>　　3 實驗方法6</b></p><p>　　3.1 菌種的富集培養(yǎng)6</p><p>　　3.2 菌種的篩選6</p><p>　　3.3 菌種的生理生化鑒定6</p><p>　　3.4 分析方法6</p><p>

11、;　　4 實驗結(jié)果與討論7</p><p>　　4.1 篩選結(jié)果7</p><p>　　4.2 菌株XL-3的鑒定8</p><p>　　4.3 菌株XL-3培養(yǎng)條件的優(yōu)化9</p><p><b>　　5 小結(jié)11</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)11</

12、b></p><p>　　致 謝錯誤!未定義書簽。</p><p>　　[摘要] 伴隨著現(xiàn)代石油工業(yè)的快速發(fā)展，石油污染的問題也逐漸嚴(yán)重，這意味著，如何正確地解決石油污染的問題也日趨重要。在治理石油污染的各種方法里，微生物降解是最有效的而且對環(huán)境的危害也是最小的。所以本文就從被石油污染的土壤中篩選石油烴降解菌,通過分離和培養(yǎng)了其中三株生長較穩(wěn)定的石油烴降解菌，然后，采用紫外線分光光

13、度計測定這三種降解菌的降解率，取降解率最高的降解菌做進(jìn)一步的研究，經(jīng)過生理生化的鑒定，這種高效率的石油烴降解菌降解菌屬于假單胞菌屬，通過pH值和溫度等單因素的優(yōu)化，確定降解菌的最優(yōu)溫度為35℃，最適pH值為5.0，并在接種量為5%時，降解率達(dá)到最高值70%。</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 石油烴；降解菌；篩選</p><p>　　[Abstract] With the rapid dev

14、elopment of the modern Oil Industry, the problem of oil pollution is also increasing, so how to solve becomes important. Among the ways of different solutions, the microbial degradation is the most effective, which is al

15、so the least harmful to environment. So this article is arming on isolation of the ordinary petroleum hydrocarbon degrading bacteria and understanding the basic nature of them and finding the best conditions of their liv

16、ing environment. It was found t</p><p>　　[Key words] Petroleum hydrocarbons; Degrading bacteria; Microbiology； Isolation</p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　1.1 土壤石油污染的來源</

17、p><p>　　石油污染泛指原油和石油初加工產(chǎn)品(包括汽油、煤油、柴油、重油、潤滑油等)及各類石油的分解產(chǎn)物所引起的污染。在石油的開采、貯運、煉制加工以及使用過程中，不可避免的會造成石油的溢出和排放，對環(huán)境（大氣、土壤、地表及地下水）產(chǎn)生極大影響。土壤作為物質(zhì)循環(huán)及能量交換的重要場所，常常是污染物在環(huán)境中遷移、滯留和沉積的最終承受者。石油污染物主要通過以下三種途徑進(jìn)入到土壤：⑴原油泄漏和溢油事故引起落地原油污染；⑵含

18、油礦渣、污泥和垃圾的堆置，致使石油向土壤滲漏并向周圍擴(kuò)散；⑶含油污水灌溉農(nóng)田[1]。這三個因素造成的污染面積大、污染物含量高，都是引起土壤石油污染最主要的因素。</p><p>　　同時，對石油開采等過程中產(chǎn)生的含油污泥處理不恰當(dāng)也是另一個主要的因素。在原油的脫水過程中，脫水罐、污水罐等底部積累了大量含油的污泥；在煉油廠的污水處理場（像隔油池底、曝氣池等）也存在著大量的含油污泥。而使用含油污水灌溉農(nóng)田是產(chǎn)生土壤石

19、油污染的另一重要因素。據(jù)不完全的統(tǒng)計，由于普遍使用污水的灌溉，導(dǎo)致土壤污染的面積已經(jīng)達(dá)到了9300公頃。</p><p>　　現(xiàn)在世界石油總產(chǎn)量每年在近3×l010t左右，我國當(dāng)前石油年產(chǎn)量也早己超過1×108t，而每年新污染的土壤也達(dá)1×105t之多[2]。</p><p>　　1.2 石油污染物對土壤的危害</p><p>　　由于

20、石油污染物難以消除，當(dāng)大量的石油污染物進(jìn)入環(huán)境，不僅破壞生態(tài)平衡，制約了經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，而且影響到人類的健康和生存[3]，其主要影響表現(xiàn)在以下三方面：</p><p>　　1、對土壤理化性質(zhì)的影響</p><p>　　石油類污染物進(jìn)入土壤后，由于密度小和具有疏水性，容易在土壤中與土粒粘結(jié)，影響土壤的透氣性；其次，石油中含有大量的有機(jī)碳，會改變土壤的結(jié)構(gòu)，使碳、氮、磷比例嚴(yán)重失衡；再次，由于石油

21、還會限制營養(yǎng)元素，不能使其從土壤顆粒進(jìn)入到土壤溶液中，導(dǎo)致土壤肥力的下降。而植物的根系通常在土壤表層比較發(fā)達(dá)，所以石油對土壤的污染可直接阻礙植物根系的呼吸與營養(yǎng)的吸收，可引起根系腐爛，進(jìn)而影響到植物的生長[4]。</p><p>　　2、對土壤微生物群落的影響</p><p>　　微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)中的重要成分，在土壤的物質(zhì)流動和能量轉(zhuǎn)移中起到重要作用。許多研究者表明，許多石油的成分，對

22、很多微生物有毒害作用，因此當(dāng)污染物進(jìn)入土壤環(huán)境后，會破壞土壤微生物群落的結(jié)構(gòu)和改變?nèi)郝涞亩鄻有浴?lt;/p><p>　　3、對人類和動物的影響</p><p>　　通常，石油污染物可通過皮膚接觸、呼吸等途徑，進(jìn)入到動物和人體內(nèi)，降低器官的正常功能，會引發(fā)多種的疾病。而且，石油對動物的多種器官也會有損傷，在石油的各個組分中，石油中的芳香烴對生物的毒性最嚴(yán)重，尤其是多環(huán)芳烴的毒性。許多研究都表明

23、，一些石油烴類進(jìn)入動物體內(nèi)后，對哺乳類動物及人類有致癌、致畸和致突變的作用[5]。</p><p>　　總之，由于石油特殊的物理化學(xué)性質(zhì)，殘留時間長，使土壤中的碳源大量增加，直接導(dǎo)致土壤中C:N比失調(diào)以及酸堿度的變化，破壞了土壤結(jié)構(gòu)，給受污染土壤帶來一系列的危害，對污染地區(qū)的生態(tài)、作物以及人類健康造成諸多負(fù)面影響[6]。</p><p>　　1.3 石油污染物的修復(fù)</p>

24、<p>　　雖然土壤對石油的污染具有一定的自凈能力，能通過本身的一些物理和化學(xué)變化，來消除石油污染的副作用。但是當(dāng)進(jìn)入環(huán)境的石油污染物超過了土壤自凈的能力時，這種自凈作用就不能負(fù)荷了。所以，經(jīng)過人們的不斷研究，慢慢出現(xiàn)了以物理法、化學(xué)法和生物修復(fù)法等的人工修復(fù)石油烴污染的方式。但是物理、化學(xué)修復(fù)法雖然可以產(chǎn)生一定的處理效果，但都存在明顯的缺陷：處理成本較高、處理不徹底以及易產(chǎn)生嚴(yán)重的二次污染問題[7]。</p>

25、<p>　　石油污染物的生物修復(fù)法，是指利用特殊的生物進(jìn)行吸收、轉(zhuǎn)變、消除或降解石油污染物的污染，使環(huán)境慢慢凈化。它最根本的出發(fā)點是使石油烴作為反應(yīng)物參與了微生物的生化反應(yīng),微生物通過代謝作用降解土壤中的污染物[8]。所以生物修復(fù)技術(shù)具有費用廉價、處理的效果好、對環(huán)境的副作用小、沒有二次污染、也不破壞植物生存所要的土壤環(huán)境等突出的優(yōu)點。</p><p>　　1.4 微生物降解石油烴的研究</p&g

26、t;<p>　　1.4.1 降解石油微生物的種類</p><p>　　目前為止，能降解石油中各種烴類的微生物共有100余屬、200多種。分別屬于細(xì)菌、放線菌、霉菌及酵母菌等，其中細(xì)菌約占40個屬，在海洋生態(tài)系統(tǒng)中占主導(dǎo)地位[9]。其中，原核微生物主要有假單孢菌屬、芽抱桿菌屬、無色桿菌屬等；真菌主要是假絲酵母屬、紅酵母屬、青霉屬、木霉屬等；此外，藻類也是降解石油污染物的微生物群落的一種，如魚腥藻屬、鞘

27、藻屬、念珠藻屬等。</p><p>　　但一般情況下，降解微生物只占總微生物群落全部的1%，即使在石油污染物存在時，降解者的比例也只會增加到10%[10]。并且在許多環(huán)境下，降解菌的降解率不高，所以篩選高效的石油降解菌的研究受到人們普遍的關(guān)注。</p><p>　　1.4.2 微生物降解的機(jī)理</p><p>　　微生物降解石油烴的過程主要分三步來進(jìn)行:首先是石油烴

28、在水中的溶解力跟在微生物表面的吸附;其次是石油烴在微生物細(xì)胞膜內(nèi)的跨膜運輸;最后是石油烴進(jìn)入細(xì)胞膜內(nèi)與降解酶結(jié)合時發(fā)生的酶促反應(yīng)[11]。具體如下：</p><p>　　第一，石油烴在微生物表面的吸附。由于石油烴是屬于疏水性化合物，大部分的石油烴仍會吸附在土壤顆粒上，不容易直接被微生物所利用，則限制了微生物對石油烴降解的能力。然而，微生物卻能調(diào)節(jié)自身的適應(yīng)機(jī)制來提高對石油烴的利用率。目前有兩種解釋：一種是特異性附

29、著機(jī)制，另一種是是烴類乳化機(jī)制[12]。</p><p>　　第二，石油烴的跨膜運輸。這個過程是石油烴降解菌的重要環(huán)節(jié)。但是由于對這個跨膜運輸?shù)臋C(jī)理尚未清楚，目前的理論存在被動運輸和主動運輸兩種理論[13]。例如，有人認(rèn)為萘是通過被動運輸?shù)姆椒ㄟM(jìn)入到微生物體內(nèi)的，并不存在轉(zhuǎn)運蛋白。相反，另外一些人則認(rèn)為微生物在吸收萘的過程中有存在主動運輸。甚至也有部分研究表明，由微生物產(chǎn)生的生物表面的活性劑能使其細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)發(fā)生

30、改變，從而增加污染物通過細(xì)胞膜的概率[14]。</p><p>　　第三，石油烴在微生物內(nèi)的降解機(jī)理。一般情況下，C1~C3的氣態(tài)成分甲烷、乙烷和丙烷，只能被極少數(shù)的微生物利用；而碳原子數(shù)大于4的化合物，其分子量越小越容易被微生物降解；而當(dāng)碳原子數(shù)相同時，飽和烴比不飽和烴更容易被降解，直鏈比支鏈化合物更易被降解[15~18]。</p><p>　　2 實驗材料、主要儀器與試劑</p&

31、gt;<p><b>　　2.1 實驗材料</b></p><p>　　土樣：取溫州、寧波、山東、麗水和紹興等地適量的土壤。</p><p><b>　　2.2 主要儀器</b></p><p>　　儀器名稱 型號 廠家</p&g

32、t;<p>　　高壓滅菌鍋 DYM-YK20L 北京勤誠盛達(dá)科學(xué)儀器有限公司</p><p>　　電子分析天平 7G328B 上海天平儀器廠</p><p>　　高速離心機(jī) TGL-16C 上海

33、安亭科學(xué)儀器廠</p><p>　　恒溫干燥箱 202-0(AS) 北京勤誠盛達(dá)科學(xué)儀器有限公司</p><p>　　生化培養(yǎng)箱 SPX 寧波江南儀器廠制造</p><p>　　紫外分光光度計 UV-9100

34、 北京瑞利儀器分析公司</p><p>　　電熱恒溫水浴鍋 HHS 上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠</p><p>　　恒溫振蕩器 HZQ-C 哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司</p><p>　　pH計

35、 PD-20 北京賽多利斯天平有限公司</p><p>　　超凈工作臺 W-CJ-IF 蘇凈集團(tuán)安泰公司</p><p><b>　　2.3 主要試劑</b></p><p>　　試劑

36、純度 產(chǎn)地</p><p>　　牛肉膏 生化試劑 北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司</p><p>　　大豆蛋白胨 生化試劑 北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司</p><p>　　革蘭氏染液

37、 分析純 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　甲基紅試劑 分析純 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　微量元素溶液 分析純 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><

38、p>　　V-P試劑 分析純 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　吲哚試劑 分析純 上海勁馬生物科技有限公司</p><p>　　中性紅指示劑 分析純 上?；瘜W(xué)試劑

39、采購供應(yīng)站</p><p>　　TE緩沖液 分析純 上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站</p><p>　　碘液 分析純 上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站</p><p>　　石油醚 分析純

40、 上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站</p><p><b>　　2.4 培養(yǎng)基</b></p><p>　　2.4.1 富集培養(yǎng)基（g/L） 石油 2.5，蛋白胨 5，NaCl 5和H2O（pH7.0），以石油烴為唯一碳源</p><p>　　2.4.3 篩選培養(yǎng)基（g/L） (NH4)2SO4 1.5，CaCl2 0.

41、02，NaNO31.5，K2HPO41，KCl 0.5， MgSO4·7H2O 0.5，F(xiàn)eSO47H2O 0.01，調(diào)節(jié)至pH8.0后，在121℃下20min滅菌，冷卻后加入2.5g石油，最后加1.2%的瓊脂制造成相應(yīng)固體培養(yǎng)基。</p><p>　　2.4.4 無機(jī)鹽培養(yǎng)基（g/L） (NH4)2SO4 1，KH2PO4 1，Na2HPO4 1，CaCl2 0.1，NaCl2，MgSO4 0.2，F(xiàn)

42、eSO4·7H2O 0.01（pH 7.0）</p><p>　　2.4.5 平板培養(yǎng)基 在上述的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入20g/L的瓊脂</p><p><b>　　3 實驗方法</b></p><p>　　3.1 菌種的富集培養(yǎng)</p><p>　　用移液管移取樣品，加入到100mL的富集含油培養(yǎng)基中，在37℃,

43、140r/min的搖床振蕩培養(yǎng)7d。等培養(yǎng)液充分混合后，吸取5mL的培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到別的新鮮的富集含油培養(yǎng)基中。重復(fù)實驗3次。</p><p><b>　　3.2 菌種的篩選</b></p><p>　　3.2.1 初篩 將接種后的液體油培養(yǎng)液梯度進(jìn)行稀釋，吸取0.3ml的菌液均勻涂布到固體篩選培養(yǎng)基平板上，并且在35℃下恒溫培養(yǎng)到長出菌落為止。觀察不同的菌株在固體培養(yǎng)

44、基中生長狀態(tài)，并篩選出個別生長較快、穩(wěn)定并且基本特征一樣的菌落。</p><p>　　3.2.2 復(fù)篩 將篩選出來的菌株再次培養(yǎng)到固體培養(yǎng)基平板上，在初篩的條件下，同樣培養(yǎng)直至長出菌落為止。接著選取特征基本相同的單菌落到固體篩選培養(yǎng)基上并多次劃線分離，數(shù)次培養(yǎng)后，就會得到比較純化的單菌落。選擇三種不同形態(tài)和顏色的單菌落到不同的斜面保存培養(yǎng)基中，最后保存到冰箱里。</p><p>　　3.2

45、.3 菌種的確定 由于本課題要篩選的是對石油烴降解能力較高的降解菌，所以選擇三種生長穩(wěn)定且形態(tài)特征一致的菌種。</p><p>　　3.3 菌種的生理生化鑒定</p><p>　　根據(jù)分離菌的菌落和菌體形態(tài)，芽孢的有無和著生情況，革蘭氏染色以及生理生化反應(yīng)，按東秀珠《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》進(jìn)行接觸酶反應(yīng)、好氧性試驗、淀粉水解、硝酸鹽還原、明膠液化、糖醇類發(fā)酵耐鹽性試驗等生理生化試驗[18]

46、。</p><p><b>　　3.4 分析方法</b></p><p>　　3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定</p><p>　　將菌種轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，接到液量為100ml的三角瓶裝里，然后將三角瓶放在30℃，150rpm的搖床培養(yǎng)2小時后，取出菌液。在分光光度儀波長254nm處測定培養(yǎng)液的OD值，與未接菌種的液體培養(yǎng)基做空白對照。每隔六小時測

47、定OD值。以標(biāo)準(zhǔn)油濃度為橫坐標(biāo)，測得的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線。</p><p>　　3.3.2 石油降解率的測定</p><p>　　同樣，將不同濃度的菌種轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，接到液量為100ml的三角瓶裝里，然后將三角瓶放在35℃，150rpm的搖床培養(yǎng)2小時后，取出菌液。在254nm處，將各種菌種的稀釋液在紫外可見分光光度計下測得OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定培養(yǎng)液殘余石油烴的濃度

48、,并計算石油烴降解菌的降解率。采用以下的計算公式:</p><p>　　降解率(%)=（C1-C2）/C1×100%</p><p>　　式中:C1為石油的初始濃度mg/ml，C2為石油的測定濃度mg/ml</p><p>　　3.3.3 生長量的測定</p><p>　　細(xì)菌生長量的變化，采用菌懸液OD600間接反映。先取8mL的

49、培養(yǎng)液放入離心管中，在5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取上清液收集菌體，并用無菌水洗滌三次，將收集到的濕菌體接入到無菌水中，形成均勻穩(wěn)定的菌懸液后，定容到8mL，以無菌水為參照，在紫外分光光度計600nm處測定吸光度。</p><p>　　3.3.4 生長曲線的制定</p><p>　　取XL-3菌株接種在含有150mL富集培養(yǎng)基的錐形瓶中，在30℃、150r/min的搖瓶中培養(yǎng)

50、。在20h內(nèi)，每隔2h后取樣品；20h之后，每隔4h后取樣品，連續(xù)取到52h。每次取必須用無菌的移液管取8mL置于不同的離心管中標(biāo)號，放在冰箱中冷藏。以未接菌種的富集培養(yǎng)液在600nm處測的OD值為對比，控制其吸收值在0~0.9之間，若濃度過高，必須稀釋。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)作圖，采用比濁法測定細(xì)菌的生長曲線。</p><p><b>　　4 實驗結(jié)果與討論</b></p

51、><p><b>　　4.1篩選結(jié)果</b></p><p>　　將篩選出來的三種菌種分別記為XL-1,XL-2,XL-3。</p><p>　　在254nm處，以石油作為空白，依次測定好標(biāo)準(zhǔn)油樣品的吸光度值，繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到回歸方程。如圖所示：</p><p>　　圖1 石油濃度—吸光度曲線</p>&l

52、t;p>　　根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測得的降解率，如表1所示：</p><p>　　表1 三種菌種的降解率</p><p>　　因為XL-3的降解率最高，所以以XL-3為菌株，作進(jìn)一步的鑒定和降解條件的研究。</p><p>　　4.2 菌株XL-3的鑒定</p><p>　　4.2.1 個體形態(tài)的特征</p><p>　　

53、在電鏡下，菌株XL-3為革蘭氏陰性短桿菌，生鞭毛，不產(chǎn)生芽孢，大小為(0.5~0.8)μm×(0.8~1.2)μm，如圖2所示。</p><p>　　圖2 XL-3菌株電鏡圖</p><p>　　4.2.2 菌落的特征</p><p>　　該菌落呈半透明、圓形、白色、光滑濕潤、形態(tài)飽滿。且菌落直徑約0.16mm～0.2mm。</p><

54、p>　　4.2.3 生理生化特征</p><p>　　根據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》與《伯杰氏手冊》，鑒定了菌株XL-3的生理生化特征，結(jié)果如下表所示。</p><p>　　表2 菌株XL-3的生理生化特征</p><p>　　注：＋為陽性，－為陰性</p><p>　　利用參考文獻(xiàn)[19]進(jìn)行檢索后，初步鑒定該菌株為假單胞菌屬。<

55、;/p><p>　　4.3 菌株XL-3培養(yǎng)條件的優(yōu)化</p><p>　　4.3.1 菌株XL-3的生長曲線</p><p>　　圖3 菌株XL-3的生長曲線</p><p>　　由實驗得出的圖3，可以發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌在在0~6h內(nèi)處于延滯期，細(xì)菌生長較為緩慢；在6~20h處于對數(shù)增長期，由于合成新細(xì)胞物質(zhì)的速度最快，數(shù)量則急劇增加；在24~32h為

56、穩(wěn)定期，這時隨著培養(yǎng)基濃度的降低，代謝產(chǎn)物大量的積累，菌株的生長慢慢趨于穩(wěn)定；32h~48h之后就是細(xì)菌的衰亡期，由于培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡，細(xì)菌的生長受到抑制，死亡率大于生長率，菌體數(shù)量快速減少。</p><p>　　4.3.1 溫度對XL-3降解率和生長量的影響</p><p>　　取菌液1.0ml/L，分別接種到初始溫度為25℃、30℃、35℃、40℃、45℃溫度下的液體油培養(yǎng)基

57、中,其他條件不變，在35℃、160r/min的條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)2d,測定其降解率和生長量。如圖4所示：</p><p>　　圖4 溫度對XL-3菌株生長及石油烴降解率的影響</p><p>　　實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度較低時，石油的粘度增加，降解速度較慢；隨著溫度的升高，微生物對烴的代謝速率逐步提高，當(dāng)溫度達(dá)到在35℃左右時，降解菌的降解速率達(dá)到最大值；當(dāng)溫度繼續(xù)上升時，反而會抑制其降解能力。&

58、lt;/p><p>　　有研究表明[20]，溫度不僅會影響石油烴類的物理性質(zhì)和化學(xué)組成，還影響微生物的代謝速度、酶活性以及種群組成，最終會影響石油烴的降解。</p><p>　　4.3.2 pH值對XL-3的降解率和生長量的影響</p><p>　　將菌液按1.0 ml/L分別接種到初始pH為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和9.0的液體油培養(yǎng)基中,其他條件不變，

59、同樣在35℃、160 r/min的條件下振蕩培養(yǎng)2 d,測定其降解率和生長量。如圖5所示：</p><p>　　圖5 pH對XL-3菌株生長及石油烴降解率的影響</p><p>　　實驗發(fā)現(xiàn)，不同pH對其降解能力有不同的影響，當(dāng)pH值為4.0時，石油烴降解率較低，當(dāng)pH值達(dá)到5.0時，石油烴降解率達(dá)到最大值，而當(dāng)pH值逐漸升高時，降解菌的降解率又趨于下降。</p><p

60、>　　4.3.3 接種量對XL-3的降解率和生長量的影響</p><p>　　將菌液分別按5%、10%、15%、18%、20%接種量取到pH值分別為5.0的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基中，其他條件不變，在35℃、160r/min的條件下振蕩培養(yǎng)5d，測定其降解率和生長量。如圖6所示：</p><p>　　圖6 不同接種量對XL-3菌株生長及石油烴降解率的影響</p><p&g

61、t;　　實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)接種量為5%時，對石油的降解能力最大，隨著接種量的增加，石油烴降解率增反而逐漸減小。說明在降解過程中，接種量并非越大越好。</p><p><b>　　5 小結(jié)</b></p><p>　　本實驗研究發(fā)現(xiàn)，石油烴降解菌有多種菌屬，其中有種比較常見的為假單胞菌屬，本實驗對XL-3菌株的降解能力的作了初步探索，發(fā)現(xiàn)，在35℃下該菌株的降解率，達(dá)到60%

62、以上。為了進(jìn)一步提高菌株的降解能力，對其培養(yǎng)條件行了初步的優(yōu)化，包括pH值、溫度和接種量。實驗結(jié)果表明，通過適當(dāng)調(diào)節(jié)XL-3菌株對石油降解的條件，得出菌株在培養(yǎng)溫度為35℃、pH值為5.0、接種量為5%的條件下，其生長最旺盛，降解率高達(dá)70％。</p><p><b>　　[參考文獻(xiàn)]</b></p><p>　　[1] 張旭，李廣賀，黃巍，石油烴污染土層生物修復(fù)模擬

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