渤海魚類寄生異尖屬線蟲的分子鑒定和群體遺傳結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、利用rDNA ITS區(qū)的PCR-RFLP(DNA擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性)結(jié)合序列分析，首次對(duì)我國(guó)渤海6種魚體內(nèi)寄生的612條異尖屬線蟲幼蟲進(jìn)行分類鑒定。內(nèi)切酶HinfⅠ的酶切電泳圖包括兩種酶切條帶，分別對(duì)應(yīng)于派氏異尖線蟲（603條）和Abollo等(2003)所發(fā)現(xiàn)的重組基因型（9條）。選擇3個(gè)派氏異尖線蟲和全部的重組基因型樣品進(jìn)行ITS-1和ITS-2序列分析，結(jié)果表明酶切結(jié)果顯示為派氏異尖線蟲的樣品與Genbank上已登錄的派氏異尖線蟲

2、的ITS-1和ITS-2區(qū)的序列完全相同，再次證明其為派氏異尖線蟲，而9條重組基因型在ITS-1區(qū)出現(xiàn)了2種序列，一種在280bp和296bp處各存在一個(gè)C/T雙重疊峰（重組基因型Ⅰ，Rec1），該序列與Abollo等(2003)的結(jié)果相一致；另一種只在296bp處存在一個(gè)C/T雙重疊峰（重組基因型Ⅱ，Rec2），該重組基因型為首次報(bào)道。兩種重組基因型mtDNA SSU基因的序列分析顯示Rec1的SSU序列與派氏異尖線蟲的完全一致，而R

3、ec2的SSU序列與派氏異尖線蟲僅有1個(gè)堿基差異，推測(cè)本研究所發(fā)現(xiàn)的兩種重組基因型有可能是派氏異尖線蟲種內(nèi)變異的結(jié)果。
　　 首次采用變性梯度凝膠電泳（DGGE）結(jié)合序列分析方法對(duì)我國(guó)渤海魚類寄生派氏異尖線蟲（603條線蟲）mtDNA cox1和nad1基因的部分序列進(jìn)行群體遺傳結(jié)構(gòu)研究，結(jié)果顯示mtDNA cox1基因經(jīng)DGGE產(chǎn)生了10種不同的帶型，定義了10種單倍型（Haplotype1-10，Hap1-10），10種單倍

4、型cox1基因序列之間存在10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，nad1序列之間存在9個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，單倍型Hap3、Hap8和Hap10 nad1基因的序列完全一致。根據(jù)魚類宿主劃分派氏異尖線蟲種群，分為6個(gè)種群，分別是鮐魚種群（Pn），馬鮫種群（Sc），鳙魚種群（Ar），梅童棘頭魚種群(Co)，吉氏黃鯽種群(Se)和鲬魚種群(Pl)。分子方差分析（AMOVA）表明派氏異尖線蟲種群內(nèi)存在很高的遺傳變異，占總變異的99.89％，種群間的遺傳變異很小，僅占總變

5、異的0.11％，說(shuō)明渤海魚類寄生派氏異尖線蟲的遺傳分化主要發(fā)生在種群內(nèi)，種群間無(wú)明顯分化。梅童棘頭魚種群與其余5個(gè)種群的遺傳分化系數(shù)（Fst）在0.00836-0.04482之間，說(shuō)明梅童棘頭魚種群與其余5個(gè)種群之間存在較弱的遺傳分化；其余5個(gè)群體之間的Fst為負(fù)值，說(shuō)明這5個(gè)種群無(wú)遺傳分化。梅童棘頭魚種群和鳙魚種群或馬鮫種群之間遺傳分化系數(shù)Fst值的P檢驗(yàn)均出現(xiàn)顯著差異（P<0.05），說(shuō)明梅童棘頭魚種群與鳙魚種群或馬鮫種群之間的分化