天然紅色素抑菌活性研究[畢業(yè)設(shè)計(jì)]

1、<p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)</p><p><b>　　（二零 屆）</b></p><p>　　天然紅色素抑菌活性研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物工程 </p&g

2、t;<p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘要: 靈菌紅素是一些放線菌、沙雷氏菌及其它細(xì)菌產(chǎn)生的具有重要生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物。由

3、于其生物學(xué)特性，除了在抗腫瘤，免疫抑制等醫(yī)療方面有較高的研究?jī)r(jià)值外，其作為一種天然色素以及天然抑菌劑，在紡織業(yè)，畜牧業(yè)也有較好的發(fā)展前景。本研究主要測(cè)試了靈菌紅素對(duì)一些常見的細(xì)菌的抑菌能力，確定其最小抑菌濃度及殺菌濃度，從而為其作為生態(tài)染料，飼料添加劑等研究方向提供參考。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其對(duì)金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌等革蘭氏陽(yáng)性菌具有較好的抑菌效果，而對(duì)大腸桿菌抑菌效果不顯著。</p><p>　　關(guān)鍵詞: 靈菌

4、紅素；抑菌性；最小抑菌濃度；最小殺菌濃度</p><p>　　Abstract: Prodigiosins with important biological activity secondary metabolites are produced by a number of Actinomycetes, Serratia and other bacteria. Because of the biological

5、 characteristics, prodigiosin is used as antitumor medicine, immunosuppressive agent and other medical research. As a natural pigment and natural antimicrobial agent, prodigiosin possesses good prospects for development

6、in the textile industry, animal husbandry. The study tested the antimicrobial activity of prodigiosin o</p><p>　　Keywords: Prodigiosin; antibacterial property; MIC，MBC</p><p><b>　　目 錄<

7、;/b></p><p>　　摘要錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　Abstract錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1 緒論錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.1 靈菌紅素簡(jiǎn)介錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.2 靈菌紅素的理化性質(zhì)錯(cuò)誤!未定義書簽。</p&g

8、t;<p>　　1.2.1 靈菌紅素抗真菌作用錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.2.2 靈菌紅素抗細(xì)菌作用1</p><p>　　1.3 靈菌紅素的應(yīng)用1</p><p>　　1.3.1 靈菌紅素抗瘧疾活性1</p><p>　　1.3.2 靈菌紅素抗腫瘤作用2</p><p>

9、;　　1.3.3 靈菌紅素免疫抑制劑活性2</p><p>　　1.4 靈菌紅素的應(yīng)用前景2</p><p>　　1.4.1 在食品上的應(yīng)用2</p><p>　　1.4.2 在紡織染工業(yè)的應(yīng)用3</p><p>　　1.4.3 靈菌紅素在動(dòng)物飼料方面的應(yīng)用3</p><p>　　1.4.4 在醫(yī)學(xué)臨床上

10、的應(yīng)用3</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)部分4</b></p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)器材4</p><p>　　2.1.1 菌種4</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器4</p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品4</p><p>　　2

11、.2 分析方法4</p><p>　　2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容4</p><p>　　2.3.1 靈菌紅素提取5</p><p>　　2.3.2 抑菌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備6</p><p>　　2.3.3 指示菌菌懸液的制備6</p><p>　　2.3.4 最小抑菌濃度的測(cè)定7</p><p&

12、gt;　　2.3.5 最小殺菌濃度的測(cè)定7</p><p>　　3 結(jié)果與分析8</p><p>　　3.1 靈菌紅素溶液對(duì)大腸桿菌抑菌的測(cè)定8</p><p>　　3.1.1 最小抑菌濃度 (MIC)8</p><p>　　3.1.2 最小殺菌濃度（MBC）8</p><p>　　3.2 靈菌紅

13、素對(duì)枯草芽孢桿菌抑菌的測(cè)定10</p><p>　　3.2.1 最小抑菌濃度 (MIC)10</p><p>　　3.2.2 最小殺菌濃度（MBC）10</p><p>　　3.3 靈菌紅素對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌的測(cè)定12</p><p>　　3.3.1 最小抑菌濃度 (MIC)12</p><p>　

14、　3.3.2 最小殺菌濃度（MBC）12</p><p>　　4 結(jié)論錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　參考文獻(xiàn)錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　致 謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　緒論</b></p><p>　　1.1 靈菌紅素簡(jiǎn)介</p&g

15、t;<p>　　靈菌紅素(prodigiosins)又名靈菌素、靈桿菌素，分子式為C20H25N30 (M=323．1968)，具有三吡咯環(huán)骨架結(jié)構(gòu)[1-2]，根據(jù)其側(cè)鏈基鏈基團(tuán)結(jié)構(gòu)的不同，靈菌紅素族還包括prodigiosin，prodigiosim25-C，metacycloprodigiosi(nMP)desmethoxyprodigiosin和uncedylprodigiosin(UP)等一系列結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似的物質(zhì)

16、。 靈菌紅素是一類含甲氧基吡咯骨架結(jié)構(gòu)的天然色素，是一些放線菌及其他細(xì)菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有免疫抑制、抗細(xì)菌、抗真菌、和抗瘧疾等多種生物活性[3-4]。</p><p>　　1.2靈菌紅素的理化性質(zhì)</p><p>　　PG 屬于脂溶性色素，易溶于甲醇和丙酮，不溶于水，在極性較強(qiáng)的酸性和堿性水溶液中微溶，在極性較弱的有機(jī)溶劑如乙醚或石油醚中微溶或不溶；PG 對(duì)溫度穩(wěn)定，但受pH 的影響較大

17、，酸性環(huán)境中能保持較長(zhǎng)的時(shí)間，堿性條件下則損失較大；Al3+，Ca2+，K+ ，Ba2+ 等金屬離子對(duì)PG 的穩(wěn)定性影響不大，Zn2+ 有使PG 增色的作用，Mg2+ 和Mn2+ 對(duì)PG有一定的破壞作用，Pb2+ 可以絡(luò)合PG，使之成為沉淀[5]；白光和藍(lán)光使PG 發(fā)生光解，在紅光和遠(yuǎn)紅光下PG 則不會(huì)降解[6]。</p><p>　　1.2.1 靈菌紅素抗真菌作用</p><p>　　

18、研究發(fā)現(xiàn)MS-02-063菌株能產(chǎn)生大量的靈菌紅素類似物PG-L-1，通過NCCLS法研究其體外抗真菌活性[7]，研究結(jié)果表明，盡管其最小抑制濃度值比聯(lián)苯芐唑微微要高，但卻顯示出了抗醫(yī)學(xué)上分離的9種Trichophyton的菌株的能力，盡管PG-L-1導(dǎo)入角質(zhì)層表皮的效率比聯(lián)苯芐唑要低，但在低濃度下卻顯示出了更大的抗真菌潛力。</p><p>　　1.2.2 靈菌紅素抗細(xì)菌作用</p><p&

19、gt;　　PG 具有抗細(xì)菌（antibacterial）、抗真菌（antifungal）的生物活性[7-8]。Cang 等以沙雷菌發(fā)酵生產(chǎn)的PG 做抗菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，對(duì)芽孢桿菌具有顯著地殺滅作用。PG 結(jié)構(gòu)類似物具有顯著的抗Trichophyton spp.等真菌的活性，在臨床測(cè)試中表現(xiàn)出對(duì)Coccidmycosis引起的一種地方性真菌傳染病有良好的治愈作用[5] 。</p><p>　　1.3 靈菌紅素的應(yīng)用

20、</p><p>　　1.3.1 靈菌紅素抗瘧疾活性 </p><p>　　Isaka等從Streptomyces spectabilis BCC 4785的發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到的MP有顯著的抗瘧疾活性。 體外實(shí)驗(yàn)表明，其抑制Plasmodium falciparum K1 的IC50為0.0050±0.001 0μg/mL[1,9]</p><p>　　

21、靈菌紅素的應(yīng)用非常廣泛，例如Nobutaka Someya等研究了植物附生微生物產(chǎn)靈菌紅素在生物控制過程中的作用的穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)分析了抗藥?kù)`菌紅素的16sRNA與假單胞菌，根瘤菌等同屬。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，固有附生植物微生物可能可以通過削弱藥物抗生素的能力從而妨礙植物病原體與生物控制藥物的相互作用。Tsukuba等[10]從沙雷氏菌中提取疾病抑制基因?qū)雴?dòng)子控制的稻米細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這些基因修飾過的微生物能不受生物及非生物因素影響而有效抑制由Pyr

22、icularia oryzae引起的稻米爆發(fā)性疾?。灰部勺鳛橐环N新型的飼料添加劑，紡織工業(yè)中的染料，具有穩(wěn)定性好，安全性高，抑菌能力強(qiáng)，生產(chǎn)方便等優(yōu)點(diǎn)，目前正在開發(fā)應(yīng)用當(dāng)中[11]。</p><p>　　1.3.2 靈菌紅素抗腫瘤作用</p><p>　　PG具有有效的抗腫瘤活性，美國(guó)國(guó)立癌癥研究所(NSI)Melvin等發(fā)現(xiàn)PG在平均IC50為2.1μmol·L-1時(shí)對(duì)包括白血

23、病、肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、腎癌、卵巢癌在內(nèi)的八種癌細(xì)胞株中的57種不同的人癌細(xì)胞均有抗性作用。</p><p>　　Zhang 等[12]研究了靈菌紅素對(duì)胰腺惡性腫瘤細(xì)胞株8898 的抑制作用，研究表明，靈菌紅素在較低的濃度下即可對(duì)8898胰腺癌細(xì)胞的增殖產(chǎn)生明顯抑制，而且，與非腫瘤細(xì)胞的Swiss-3T3細(xì)胞的平行實(shí)驗(yàn)表明靈菌紅素對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的特異性抗細(xì)胞增殖的作用，而非腫瘤細(xì)胞

24、對(duì)于靈菌紅素的作用敏感性較低。</p><p>　　1.3.3 靈菌紅素免疫抑制劑活性[13]</p><p>　　鏈霉菌屬和沙雷氏菌生產(chǎn)出紅色物質(zhì)包括靈菌紅素metacycloprodigiocin，prodigiosene，methoxyprodigiosin和靈菌紅素25 - C。具有抗瘧疾的抗菌活性，尤其是靈菌紅素25 - C顯示了抑制免疫的作用。靈菌紅素對(duì)T淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng)有抑

25、制效果，靈菌紅素在其有效濃度范圍沒有顯示毒性。因此，靈菌紅素可以用來作為免疫抑制或在各個(gè)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，包括免疫疾病的治療需要，器官或組織移植和免疫細(xì)胞為基礎(chǔ)的疾病研究。</p><p>　　1.4.靈菌紅素的應(yīng)用前景</p><p>　　1.4.1 在食品上的應(yīng)用</p><p>　　色素可以作為一種食品添加劑，人類最初使用的都是天然色素，但是隨著合成色素發(fā)明之后

26、，逐漸取代了天然色素。但是，隨著人們生活水平的提高，人們對(duì)飲食安全越來越注重，發(fā)現(xiàn)合成色素使用過量有致癌的危險(xiǎn)，對(duì)人體有巨大的危害。而天然色素作為食品添加劑，具有安全性，無毒，色澤鮮艷，還具有一定的營(yíng)養(yǎng)和藥理保健作用，有完全取代合成色素的潛力。</p><p>　　1.4.2 在紡織染工業(yè)的應(yīng)用</p><p>　　研究表明，使用靈菌紅素來染色，其結(jié)果比其他染料的顏色更易上色，更鮮艷，耐洗

27、等優(yōu)點(diǎn)，還有，靈菌紅素本身具有抑菌性等性能，對(duì)被染色的紡織物有殺菌的作用，對(duì)人體更安全。而且，靈菌紅素在紡織染色上使用的純度要求并不高，對(duì)色素的分離提取要求較低。但是，靈菌紅素對(duì)光具有光敏性，在光下，易分解[14]。</p><p>　　隨著人們生活水平的提高，人們對(duì)安全，健康，綠色的產(chǎn)品需求日益擴(kuò)大，為了滿足社會(huì)需求，特別是內(nèi)衣，汗衫，襪子等生產(chǎn)能夠抗菌的紡織物是將來發(fā)展的一大趨勢(shì)[15]，靈菌紅素是一種天然色

28、素，可以作為紡織工業(yè)中的染料，具無毒無公害，具抗菌性能，符合社會(huì)需求的紡織品用天然抗菌劑的要求。具有穩(wěn)定性好，安全性高，抑菌能力強(qiáng)，生產(chǎn)方便等優(yōu)點(diǎn)，目前正在開發(fā)應(yīng)用當(dāng)中[16]。</p><p>　　總之，靈菌紅素在紡織上的應(yīng)用前景較大。</p><p>　　1.4.3 靈菌紅素在動(dòng)物飼料方面的應(yīng)用</p><p>　　隨著畜牧業(yè)規(guī)模化、商業(yè)化的發(fā)展，開發(fā)高效、無殘

29、留、無公害的安全飼料添加劑是社會(huì)發(fā)展的要求和必然結(jié)果。靈菌紅素作為無公害天然抗生素，抗病原（微生物或寄生蟲）活性強(qiáng)，不干擾腸道正常菌群的微生態(tài)平衡，促進(jìn)畜禽增重以及提高飼料轉(zhuǎn)化率效果顯著； 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不殘留或極少殘留于畜產(chǎn)品中；細(xì)菌或寄生蟲不易對(duì)其產(chǎn)生耐藥性，與其他抗生素不產(chǎn)生交叉耐藥性；毒性低，安全范圍大，對(duì)人畜無害，且有抗癌、抗突變突變等作用[17，-18]，作為一種新型的飼料添加劑，具有廣闊的發(fā)展前景。</p&

30、gt;<p>　　1.4.4 在醫(yī)學(xué)臨床上的應(yīng)用</p><p>　　根據(jù)靈菌紅素的生物活性，抗腫瘤性，免疫抑制性，抑菌性等，在醫(yī)學(xué)上有著巨大的前景。但是靈菌紅素在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用，需要很高的純度，必須通過國(guó)家藥用標(biāo)準(zhǔn)，這對(duì)靈菌紅素的下游的分離提取有嚴(yán)格的要求。</p><p>　　20世紀(jì)80年代以來，人們開始從基因水平研究PG的生物合成途徑及其調(diào)節(jié)， 1983年Feitels

31、on等[19]克隆了天藍(lán)色鏈霉菌與PG合成相關(guān)的基因簇，Thomason等[20]則首次將分離得到的Serratia PG生物合成基因轉(zhuǎn)入歐文氏菌（Erwinla carotovora）質(zhì)粒，成功表達(dá)并得到了PG。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)部分</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)器材</b></p><

32、p><b>　　2.1.1 菌種</b></p><p>　　金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器</p><p><b>　　表1 主要儀器</b></p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品</p><p><b

33、>　　表2 主要試劑</b></p><p><b>　　2.2 分析方法</b></p><p>　　滅菌 實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基，槍頭，培養(yǎng)皿，試管，針筒，過濾器，離心管，鑷子等均進(jìn)行高壓滅菌.然后取倍數(shù)稀釋法確定其最小抑菌濃度MIC，轉(zhuǎn)接高于未長(zhǎng)菌濃度培養(yǎng)基中的液體于新培養(yǎng)基中以確定其最小殺菌濃度MBC，實(shí)驗(yàn)結(jié)果長(zhǎng)菌表示為+，+越多表示菌越濃，-表

34、示未長(zhǎng)菌。</p><p><b>　　2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容</b></p><p>　　2.3.1 靈菌紅素提取</p><p>　　實(shí)驗(yàn)室小量制備靈菌紅素：采用普通的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，再加甘油，具體配方見表2-3,過程見圖2-1。制備時(shí)，采用500ml搖瓶搖床發(fā)酵制備，見圖2-2。分離制備靈菌紅素粗品用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀收集丙酮，儀器如圖 2-3

35、。</p><p>　　表2-3 液體培養(yǎng)基配方</p><p>　　圖2-1 靈菌紅素實(shí)驗(yàn)室小量制備過程</p><p><b>　　圖2-2 搖瓶培養(yǎng)</b></p><p>　　圖2-3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀</p><p>　　2.3.2 抑菌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備</p><p>　　

36、1）細(xì)菌（金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌）培養(yǎng)基</p><p>　　LB培養(yǎng)基配方：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，水1000ml， pH 7.0。</p><p>　　2）藥液配制 稱取一定量的靈菌紅素，溶解于二甲亞砜，制成一定濃度的藥液，備用。</p><p>　　3）滅菌 實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基，槍頭，培養(yǎng)皿，試管，針筒，過濾器，離心管，鑷子等

37、均進(jìn)行高壓滅菌</p><p>　　2.3.3 指示菌菌懸液的制備</p><p>　　LB培養(yǎng)基用于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)，將供試菌種平板劃線接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基上，37℃恒溫箱中培養(yǎng)18-24h。用接種環(huán)挑取單菌落于轉(zhuǎn)接于裝有LB培養(yǎng)基的錐形瓶?jī)?nèi)。恒溫震蕩培養(yǎng)12-18h。作為指示菌待用。</p><p>　　2.3.1 最小抑菌濃度的測(cè)

38、定</p><p>　　用液體倍數(shù)稀釋法測(cè)定最小抑菌濃度（MIC）即液體培養(yǎng)基按每管3ml分裝試管，再加入不同量的靈菌紅素溶液，配成系列濃度梯度的培養(yǎng)基，每種濃度2個(gè)重復(fù)。菌液的接種相同量5%，于37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，另取加入與靈菌紅素溶液等量的二甲亞砜的溶液的試管，以及加無菌水的試管作為對(duì)照。采用微生物比濁法比較各種濃度靈菌溶液的抑菌活性，以肉眼觀察培養(yǎng)基澄清，無細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)的最低濃度為MIC。<

39、;/p><p>　　2.3.2 最小殺菌濃度的測(cè)定</p><p>　　從各段藥物的MIC和高于MIC的試管中吸取150μl培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于相應(yīng)的裝有3ml培養(yǎng)基的試管中在37℃培養(yǎng)12h，觀察是否有菌生長(zhǎng)，無菌生長(zhǎng)的最小濃度即為該藥液對(duì)該菌的最小殺菌濃度（MBC）。</p><p><b>　　結(jié)果與分析</b></p><p&

40、gt;　　3.1靈菌紅素溶液對(duì)大腸桿菌抑菌的測(cè)定</p><p>　　3.1.1最小抑菌濃度(MIC)</p><p>　　實(shí)驗(yàn)一：指示菌液為大腸桿菌，靈菌紅素溶液濃度4 g/l，分別加入400μl、300μl、200μl、100μl、50μl該濃度靈菌紅素溶液。每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。培養(yǎng)結(jié)果數(shù)據(jù)如下：</p><p>　　表3-1 大腸桿菌渾濁程度&l

41、t;/p><p>　　只有對(duì)照組長(zhǎng)菌，說明菌都被抑制或者殺死 ，而不能找出最小抑菌濃度（MIC）。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)二：指示菌液為大腸桿菌，靈菌紅素溶液濃度4 g/l和1 g/l，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。培養(yǎng)結(jié)果數(shù)據(jù)如下：</p><p>　　表3-2 大腸桿菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素溶液對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃

42、度是0.05g/l。</p><p>　　3.1.2最小殺菌濃度（MBC）</p><p>　　實(shí)驗(yàn)三：指示菌液為大腸桿菌，靈菌紅素溶液濃度4 g/l和1 g/l，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。把前次未長(zhǎng)菌再次轉(zhuǎn)接得：</p><p>　　表3-3 大腸桿菌渾濁程度</p><p>　　表明這些濃度下大腸桿菌只是被抑制了，而未被殺死，不能

43、得出MBC，需增加殺菌濃度。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)四：指示菌液為大腸桿菌，靈菌紅素溶液濃度4 g/l和1 g/l，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。把實(shí)驗(yàn)二未長(zhǎng)菌再次轉(zhuǎn)接得：</p><p>　　表3-4 大腸桿菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素溶液對(duì)大腸桿菌的最小殺菌濃度是0.8g/l。</p><p>　　3.2靈菌紅素溶液

44、對(duì)枯草芽孢桿菌抑菌的測(cè)定</p><p>　　3.2.1最小抑菌濃度(MIC)</p><p>　　實(shí)驗(yàn)一：指示菌液為枯草芽孢桿菌，靈菌紅素溶液濃度1 g/l ，加入量分別為100μl、80μl、40μl、20μl、5μl，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。培養(yǎng)結(jié)果數(shù)據(jù)如下：</p><p>　　表3-5 枯草芽孢桿菌渾濁程度</p><p>

45、;　　可得靈菌紅素溶液對(duì)枯草芽孢桿菌的最小抑菌濃度是0.007g/l</p><p>　　實(shí)驗(yàn)二：指示菌液為枯草芽孢桿菌，靈菌紅素溶液濃度1 g/l ，加入量分別為80μl、40μl、30μl、20μl、10μl，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。培養(yǎng)結(jié)果數(shù)據(jù)如下：</p><p>　　表3-6 枯草芽孢桿菌渾濁程度</p><p>　　從而確定了靈菌紅素溶液對(duì)枯草

46、芽孢桿菌的最小抑菌濃度是0.007g/l。</p><p>　　3.2.2最小殺菌濃度（MBC）</p><p>　　實(shí)驗(yàn)三：指示菌液為枯草芽孢桿菌。靈菌紅素溶液濃度1 g/l ，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。把實(shí)驗(yàn)一未長(zhǎng)菌再次轉(zhuǎn)接得：</p><p>　　表3-7枯草芽孢桿菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素溶液對(duì)枯草芽孢桿菌的

47、最小殺菌濃度是0.013g/l。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)四：指示菌液為枯草芽孢桿菌。靈菌紅素溶液濃度1 g/l ，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。把實(shí)驗(yàn)二未長(zhǎng)菌再次轉(zhuǎn)接得：</p><p>　　表3-8 枯草芽孢桿菌渾濁程度</p><p>　　則確定了靈菌紅素溶液對(duì)枯草芽孢桿菌的最小殺菌濃度就是0.013g/l。</p><p>　　3

48、.3靈菌紅素溶液對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌的測(cè)定</p><p>　　3.3.1最小抑菌濃度(MIC)</p><p>　　實(shí)驗(yàn)一：指示菌液為金黃色葡萄球菌，靈菌紅素溶液濃度0.1 g/l和0.01g/l ，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。培養(yǎng)結(jié)果數(shù)據(jù)如下：</p><p>　　表3-9 金黃色葡萄球菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素溶

49、液對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度在0.001g/l~0.005g/l之間。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)二：指示菌液為金黃色葡萄球菌，靈菌紅素溶液濃度0.1 g/l和0.01g/l ，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液。培養(yǎng)結(jié)果數(shù)據(jù)如下：</p><p>　　表3-10 金黃色葡萄球菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素溶液對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度是0.002

50、g/l。</p><p>　　3.2.2最小殺菌濃度（MBC）</p><p>　　實(shí)驗(yàn)三：指示菌液為金黃色葡萄球菌。靈菌紅素溶液濃度0.01g/l，0.1g/l，1 g/l ，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液,把前次實(shí)驗(yàn)一未長(zhǎng)菌再次轉(zhuǎn)接得：</p><p>　　表3-11金黃色葡萄球菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素溶液對(duì)金黃色葡

51、萄球菌的最小殺菌濃度為0.005g/l~0.001g/l之間。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)四：繼續(xù)前次實(shí)驗(yàn)三操作，把靈菌紅素濃度再細(xì)化。指示菌液為金黃色葡萄球菌，靈菌紅素溶液濃度0.01g/l，0.1g/l，1 g/l ，每管3ml培養(yǎng)基和150μl菌液,把前次未長(zhǎng)菌再次轉(zhuǎn)接得：</p><p>　　表3-12 金黃色葡萄球菌渾濁程度</p><p>　　可得靈菌紅素

52、溶液對(duì)金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度是0.005g/l。</p><p><b>　　結(jié)論</b></p><p>　　從這幾次的抑菌實(shí)驗(yàn)中，可知靈菌紅素抑菌活性比較強(qiáng)。雖然只是參考了幾種常見菌，但靈菌紅素與飼料添加劑中一些常用的抗生素相比，其抑菌性能較好。其次還發(fā)現(xiàn)它對(duì)不同菌的抑菌能力有差別，對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度MIC為0.002g/l培養(yǎng)基，最小殺菌濃度M

53、BC為0.005g/l培養(yǎng)基。對(duì)枯草芽孢桿菌的MIC為0.007g/l培養(yǎng)基，MBC為0.013g/l培養(yǎng)基，對(duì)大腸桿菌最小抑菌濃度MIC為0.05g/l培養(yǎng)基，最小殺菌濃度MBC為0.8g/l培養(yǎng)基。對(duì)酵母、霉菌的等真菌的抑菌實(shí)驗(yàn)，本人做了幾次初步檢測(cè)，效果不是很明顯?？偟膩碚f，靈菌紅素在這三種菌中對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等革蘭氏陽(yáng)性菌具有較好的抑菌效果，而對(duì)大腸桿菌抑菌效果較弱，效果不夠理想，而作為布料、飼料中的殺菌類添加劑的

54、應(yīng)用還有待考證。這些結(jié)果對(duì)靈菌紅素在紡織、畜牧業(yè)等中的應(yīng)用具有一定的參考價(jià)值，但若要實(shí)際應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中，還需進(jìn)一步的探索與研究。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 劉同軍,楊海龍,唐華.靈菌紅素的研究進(jìn)展[J].食品與藥品.2007,9(8):47-51.</p><p>　　[2] 王春玲.靈菌紅素

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