AtATM3和CYP2E1基因增強轉(zhuǎn)基因紫花苜?？怪亟饘俸陀袡C物能力研究.pdf

1、近年來，隨著工業(yè)化進程的加快，我國的環(huán)境污染形勢日益嚴(yán)峻，土壤污染問題凸顯，嚴(yán)重阻礙經(jīng)濟發(fā)展和損害人體健康，因此控制與修復(fù)土壤污染勢在必行。目前，土壤污染修復(fù)主要包括物理/化學(xué)修復(fù)和生物修復(fù)兩大類。植物修復(fù)技術(shù)因更加快速、高效、費用低，且便于推廣，近年來呈現(xiàn)出良好的發(fā)展前景。
　　本研究旨在利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將兩個基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿以提高其對土壤重金屬和有機物復(fù)合污染的修復(fù)能力;AtATM3和細胞色素氧化酶基因CYP2E1是兩種分別與重

2、金屬和有機物抗性、積累相關(guān)的基因。目前，國內(nèi)外尚未出現(xiàn)同時利用這兩個基因進行土壤修復(fù)的報道。
　　實驗構(gòu)建含有CYP2E1基因的植物表達載體:用目的基因替換表達載體pBI121上的Gus基因，構(gòu)建P35S-CYP2E1-T35S表達盒，即質(zhì)粒pBI121-CYP2E1。然后通過凍融法將表達載體pBI121-CYP2E1，同另一植物表達載體pCambia-AtATM3轉(zhuǎn)入同一農(nóng)桿菌LBA4404中。
　　實驗選取“阿爾岡金”紫

3、花苜蓿下胚軸作為基因轉(zhuǎn)化受體，通過組織培養(yǎng)研究，篩選并優(yōu)化胚性愈傷組織的誘導(dǎo)分化條件，構(gòu)建并優(yōu)化了適合“阿爾岡金”的遺傳轉(zhuǎn)化再生體系。經(jīng)共轉(zhuǎn)化將AtATM3基因和CYP2E1基因?qū)搿鞍枌稹弊匣ㄜ俎Ｖ?。?jīng)共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)最終獲得了186株抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因植株。
　　篩選出的186株抗性植株應(yīng)用PCR和RT-PCR進行分子學(xué)水平檢測后，對轉(zhuǎn)基因植株的抗重金屬和有機物功能進行了鑒定。結(jié)果表明所獲得抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基