TaMBDs在小麥葉片中的表達特性及原核表達載體的構建和體系的優(yōu)化.pdf

1、為了探討MBD基因與小麥春化作用的關系，本文利用半定量RT-PCR系統(tǒng)分析了6個TaMBDs在4個小麥品種中不同春化處理下、不同發(fā)育時期的葉片中的表達特性；并構建6個TaMBDs的原核表達載體，優(yōu)化了融合蛋白的誘導表達條件，主要研究內容如下： 1.選取2個春麥品種（遼春10號和豫麥18）和2個冬麥品種（京841和肥麥），春麥分別進行10、20、30天的春化處理，冬麥分別進行10、20、30、40、50和60天春化處理，取各品種、

2、各處理不同發(fā)育時期的葉片為材料，利用半定量RT-PCR方法系統(tǒng)分析了6個TaMBDs在4個小麥品種的不同處理條件、不同發(fā)育時期的葉片中的表達特性，結果表明：在兩個春麥品種中，TaMBD1在不同處理條件、不同發(fā)育時期的葉片中表達量基本一致，表明TaMBD1在春麥葉片中的表達不受低溫處理和發(fā)育時期的影響。TaMBD2、TaMBD3和TaMBD4在不同處理條件、不同發(fā)育時期表達量有差異，且均隨春化處理時間的延長而表現出高表達時期的提前；TaM

3、BD6的表達表現出不同的趨勢。在兩個冬麥品種中，TaMBD1在不春化處理（春化0天）時，在不同發(fā)育時期葉片中的表達量基本一致，但不同春化處理后，TaMBD1在不同發(fā)育時期小麥葉片中的表達量表現出差異，表明TaMBD1在冬麥葉片中的表達受低溫處理的影響；在春化處理0天、10天和20天條件下，TaMBD2在發(fā)育不同時期葉片中的表達量基本相當；春化處理30天后，其在不同時期葉片中有明顯的表達差異：TaMBD3、TaMBD4、TaMBD5和Ta

4、MBD6在不同春化處理、不同發(fā)育時期表達量有差異，且均隨春化處理時間的延長后期葉片中的表達被抑制，表明TaMBDs可能參與了小麥春化發(fā)育調控，但具體的生物學功能有待于進一步驗證。 2.成功構建了6個小麥編碼甲基結合蛋白基因的原核表達載體pGEX-TaMBDs，并在大腸桿菌BL21（DE3）工程菌株中優(yōu)化了融合蛋白GST-TaMBDs的誘導表達條件。結果表明，用0.3、0.5和1.0mmol·L-1的IPTG誘導后，融合蛋白GST