Pseudomonas mediterranea G-229-21T鐵載體相關基因purL的克隆及功能分析.pdf

1、菌株G-229-21T為在限鐵條件下從煙草根際中篩選到的一株能夠產生高親和力鐵載體的地中海假單胞菌（Pseudomonas mediterranea）。用抗生素平板法對P.mediterranea G-229-21T進行抗藥性試驗，結果表明G-229-21T對卡那霉素敏感，能夠耐受濃度的20μg/mL氯霉素。利用轉座子Tn5-1063a對G-229-21T進行轉座子插入誘變，篩選出1株鐵載體合成缺失突變株：G-229-21TA，并以P.

2、mediterranea特異性引物PC5/1和PC5/2進行特異性擴增證實了突變株由出發(fā)菌株突變而來。根據轉座子Tn5-1063a上luxA序列特異引物，分別以G-229-21T總DNA、突變株總DNA進行PCR擴增后證明突變株G-229-21TA的luxA序列與已知的luxA序列同源性為100％，即轉座子Tn5-1063a已插入到G-229-21T基因組中。
　　 根據轉座子Tn5-1063a兩端的已經報道的3個嵌套引物，及7

3、個隨機引物，用TAIL-PCR（Thermal asymmetric inter laced PCR）方法，從突變株G-229-21TA中克隆到鐵載體合成相關基因purL。采用兼并引物PCR和TAIL-PCR法，獲得了完整的P.mediterranea G-229-21T基因序列purL。該基因與Pseudomonas fluorescens Pf-5 purL基因的同源性最高為90％。purL編碼甲酰甘氨脒核苷酸合成酶（FGAM sy

4、nthetase），在嘌呤核苷酸的合成途徑中催化第四步由甲酰甘氨酰胺核苷酸到甲酰甘氨脒核苷酸的轉變過程。
　　 研究表明由于嘌呤途徑的阻斷將導致許多依賴于ATP的生化反應不能正常進行，一些以嘌呤為必需基團的酶也會失活，因此嘌呤合成途徑具有復雜效應。另外，微生物鐵載體的合成和運輸是一個十分復雜的過程，同時，微生物鐵載體代謝途徑受到影響也會影響微生物鐵載體的合成或者運輸。因此得出結論，purL基因與鐵載體的合成有關，并對purL基因