豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、應(yīng)用Marc-145細(xì)胞擴(kuò)增豬繁殖與呼吸綜合征福州株病毒(PRRSV FZ)，根據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)已發(fā)表的核苷酸序列，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物(P1/P2)，用RT-PCR的方法擴(kuò)增PRRSV FZ株的全長(zhǎng)糖基化囊膜蛋白基因(ORF5)，將擴(kuò)增產(chǎn)物連接到pMD18 simple T Vector中并轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α中，篩選陽(yáng)性重組質(zhì)粒進(jìn)行序列測(cè)定與分析。結(jié)果表明，PRRSV FZ株與AY885248.1株的ORF5

2、基因核苷酸的同源為100％，與BJ-4株的核苷酸同源性為99.5％，與美洲株VR-2332的核苷酸同源性為99.3％，而與歐洲型(LV)毒株的同源性則為27.1％，因此此株病毒屬于美洲型毒株。 陽(yáng)性重組的質(zhì)?？寺〉皆吮磉_(dá)載體pGEX-6p-1(+)上，篩選陽(yáng)性克隆進(jìn)行酶切與序列鑒定，結(jié)果表明重組表達(dá)載體構(gòu)建成功。將鑒定為陽(yáng)性的重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌E.coli BL21中，鑒定為陽(yáng)性者用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，原核表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)