胎兒彎桿菌表面蛋白SapA間接ELISA檢測方法的建立及其單克隆抗體的制備.pdf

1、本研究應(yīng)用PCR方法擴(kuò)增出胎兒彎桿菌表面蛋白基因（SapA）的2個基因片段SapA—N（1398bp）和SapA—C（1422bp），將2個基因片段分別連于表達(dá)載體pET32a（+），在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)，用Ni—NTA His Bind蛋白質(zhì)純化法純化可溶的融合蛋白，Western blot分析2種重組蛋白的抗原活性。結(jié)果表明，表達(dá)的2部分蛋白分子量大小約66Ku，與預(yù)計(jì)大小相符，純化蛋白液的濃度分別為2.964mg/ml和2

2、.726mg/ml。2種蛋白均具有良好的抗原活性，rSapA—N比rSapA—C的免疫學(xué)活性更高。 進(jìn)一步以表達(dá)的rSapA—N作為包被抗原建立了間接ELISA檢測方法，所建立的間接ELISA檢測方法特異性和敏感性良好，分別為94.3％和88.6％。用間接ELISA方法檢測的70份布魯氏菌病的陽性血清樣品，有4份為胎兒彎桿菌病抗體陽性，32份牛傳染性鼻氣管炎的陽性血清中有2份為胎兒彎桿菌病抗體陽性，24份牛新胞子蟲病的陽性血清樣

3、品中有7份為胎兒彎桿菌病抗體陽性，表明在引起牛流產(chǎn)的疫病中，存在多種致病微生物混合感染的情況。 用上述表達(dá)的胎兒彎桿菌表面蛋白rSapA—N免疫小鼠，采用細(xì)胞融合技術(shù)，獲得2株能分泌抗rSapA—N單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞（A2D5和C1B6），并對2株雜交瘤細(xì)胞及其分泌的單克隆抗體進(jìn)行了部分生物學(xué)特性研究。結(jié)果表明，2株雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體的Ig亞型均為IgG1，輕鏈為κ鏈。Western blot證實(shí)2株McAb均能與r