枯草芽孢桿菌MA139多菌耦合固體發(fā)酵及其在大鼠體內(nèi)抗菌活性研究.pdf

1、芽孢桿菌作為益生菌具有幫助動(dòng)物消化和維持腸道微生態(tài)平衡的效果，并具有在飼料日糧中部分替代抗生素的潛力。研究探討芽孢桿菌的發(fā)酵水平及其可能的體內(nèi)特性，對(duì)于益生菌的應(yīng)用和推廣具有重要價(jià)值。本論文以先前分離并表現(xiàn)出良好益生潛力的菌株Bacillus subtilis MA139為基礎(chǔ)，探討了其固體發(fā)酵工藝及可能在動(dòng)物胃腸特異性的抗菌活性。
　　在芽孢桿菌的固體發(fā)酵研究中，以B. subtilis MA139和L.reuteri G8-5

2、為發(fā)酵劑，基于豆粕：玉米粉：麥麩=1：1：2的基質(zhì)上相繼優(yōu)化了基質(zhì)含水量、初始pH值、接種量、基質(zhì)裝量、滅菌類型、發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵類型等相關(guān)發(fā)酵參數(shù)，得到的最適工藝為：含水量為50％，20倍糖蜜稀釋液的初始pH=6.5，接種量為2%，搖瓶發(fā)酵基質(zhì)裝量為30～35 g/250 g且無需滅菌，發(fā)酵時(shí)間為2 d。耦合發(fā)酵最后得到了羅伊氏乳桿菌G8-5最大濃度約為9.01±0.15 log CFU/g，枯草芽孢桿菌孢子最大濃度約為10.30±0.

3、08 log CFU/g。相對(duì)于L. reuteri G8-5單菌發(fā)酵，加入B. subtilis MA139的耦合發(fā)酵顯著增加了G8-5的活菌濃度，促進(jìn)了固體基質(zhì)中還原糖快速消耗和pH值的顯著降低（P<0.05）。同時(shí)，添加B.subtilis MA139顯著增加了L. reuteri G8-5對(duì)E.coli K88+的抗菌活性（P<0.05）。
　　本試驗(yàn)進(jìn)一步探討了B.subtilis MA139對(duì)動(dòng)物胃腸道健康保護(hù)的抗菌作

4、用機(jī)理。72只SD大鼠被分為三個(gè)處理，分別為陽性對(duì)照組、芽孢組和陰性對(duì)照組，每個(gè)處理1只大鼠，8個(gè)重復(fù)。通過飲水添加的方式使芽孢組大鼠每日攝入約107 CFU B. subtilis MA139芽孢，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后第6天分別給芽孢組和陽性對(duì)照組大鼠一次性灌服1010CFU腸毒性的E. coli K88-pGFP，分別在攻毒后第12 h、24 h、36 h及48 h在陽性PC組和芽孢BT組隨機(jī)取8只斷頸處死，分別測(cè)定胃腸內(nèi)容物（十二指腸、空腸

5、、回腸、盲腸及結(jié)腸）中E. coli K88-pGFP的數(shù)量。結(jié)果表明，在攻毒后的第12 h、24 h、36 h，B. subtilis MA139在SD大鼠十二指腸中對(duì)E. coli K88-pGFP活性有顯著的抑制作用（P<0.05）；在攻毒后12 h，B. subtilis MA139在空腸段對(duì)E. coli K88-pGFP活性有顯著的抑制作用（P<0.05）；在攻毒后12 h和36 h，B. subtilis MA139在回腸

6、段對(duì)E. coli K88-pGFP活性有顯著的抑制作用（P<0.05）；在攻毒后12 h和48 h，B. subtilis MA139在盲腸段對(duì)E. coli K88-pGFP活性有顯著的抑制作用（P<0.05）；在攻毒后12 h和24 h，B. subtilis MA139在結(jié)腸段對(duì)E. coli K88-pGFP活性有顯著的抑制作用（P<0.05）。此結(jié)果表明B. subtilis MA139在特定的時(shí)間和特定的腸段表現(xiàn)出對(duì)E.c