飼用枯草芽孢桿菌的篩選及其發(fā)酵豆粕技術(shù)研究.pdf

1、本文主要研究內(nèi)容是從健康仔豬糞便中針對性的篩選出飼料添加益生芽孢桿菌菌株并進行相關(guān)鑒定，進行體外性能評價，以豆粕為主要發(fā)酵基質(zhì)利用其進行固態(tài)發(fā)酵，優(yōu)化發(fā)酵條件，從而制備以豆粕為載體的活菌菌劑。
　　本文以新鮮健康仔豬糞便為樣品，經(jīng)過低pH、高濃度膽鹽、抑菌性實驗篩選及形態(tài)學(xué)、生理生化、分子生物學(xué)鑒定，篩選并命名出枯草芽孢桿菌2株（NCU901、NCU902）、地衣芽孢桿菌1株（NCU903）、短小芽孢桿菌1株（NCU904）。選取

2、抑菌性能最好菌株枯草芽孢桿菌NCU901進行后續(xù)實驗研究。
　　為確定枯草芽孢桿菌NCU901各生長時期，對NCU901進行為期120 h的生長曲線繪制，得出NCU901延滯期時間較短為0～2 h，指數(shù)期為2~20 h，后20~120 h其存活率維持在較穩(wěn)定范圍內(nèi)。耐熱性實驗表明，在40 ℃、60 ℃、80 ℃、100 ℃條件下分別處理不同時間，NCU901的死亡率都呈現(xiàn)起初短時間較高后降低的趨勢；不同溫度條件下處理20 min后

3、，40 ℃條件下存活率幾乎不受影響，60 ℃處理時存活率維持在52.75％，80 ℃存活率為33.46%，100 ℃存活率為24.42%。抑菌實驗表明，NCU901對G＋與G－致病菌均有較強的抑制作用。NCU901的16 h無菌發(fā)酵液的抑菌性能最好，其中對G＋致病菌中的金黃色葡萄球菌26003的抑菌作用最強，抑菌圈達到21.5 mm，對G－致病菌中的阪崎腸桿菌CMCC45401的抑菌作用最強。胃腸道耐受性實驗顯示，pH3.0對NCU90

4、1未有明顯影響，在pH2.0條件下處理5 h后，存活率為81.75%；在膽鹽質(zhì)量濃度為0.1%時NCU901存活率未受到影響，膽鹽濃度為0.5%處理5 h時，存活率為73.29%；體外胃腸液耐受性實驗得出胃液處理4h后，活菌數(shù)有所提升，后經(jīng)過8h腸液耐受性實驗，NCU901存活率較轉(zhuǎn)入胃液初存活率達到50.8%，較轉(zhuǎn)入腸液初存活率達到68.59%，活菌濃度為8.85 Lg(CFU/mL)，NCU901能夠較好的耐受胃腸液的殺菌作用。

5、r>　　以活菌數(shù)為指標(biāo)，利用NCU901進行發(fā)酵豆粕實驗研究。通過對單因素實驗、正交實驗及驗證實驗研究，結(jié)合發(fā)酵基質(zhì)的粘稠度及后續(xù)干燥工藝考慮，選取發(fā)酵條件為：發(fā)酵時間36 h、發(fā)酵溫度37 ℃、接種量6%、料液比1:0.8。烘箱干燥溫度由40 ℃升高到50 ℃，活菌數(shù)由10.62 Lg(CFU/g)降至10.45Lg(CFU/g)，但活菌數(shù)仍維持在較高水平；干燥溫度為60 ℃時，活菌數(shù)下降明顯，至9.76 Lg(CFU/g)；70 ℃