crylIa8基因和GsHLP2基因轉(zhuǎn)化玉米自交系的研究.pdf

1、玉米是世界上重要的糧食作物和飼料作物，但由于玉米中賴氨酸含量偏低，致使玉米中蛋白質(zhì)的實際利用率只有40％-50％。同時隨著人們生活水平的提高、膳食結(jié)構(gòu)的改變，對玉米蛋白品質(zhì)的要求越來越高。另一方面，由于蟲害的發(fā)生，玉米產(chǎn)量遭到極大的損失，其中以玉米螟危害最重。通過基因工程方法將高賴氨酸蛋白基因和抗蟲基因轉(zhuǎn)入玉米中，從而改善玉米的蛋白品質(zhì)，降低蟲害對玉米產(chǎn)量的影響具有重要的意義。
　　 本研究選取7個玉米自交系進行愈傷組織誘導(dǎo)，以

2、誘導(dǎo)出的較好的胚性愈傷組織為受體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對其進行遺傳轉(zhuǎn)化，將分別帶有高賴氨酸蛋白基因GsHLP2、抗蟲基因cry1Ia8和bar選擇標記基因的雙T-DNA表達載體轉(zhuǎn)化玉米愈傷組織，篩選共轉(zhuǎn)化植株。為通過轉(zhuǎn)基因植株后代的遺傳分離培育無選擇標記的轉(zhuǎn)基因玉米提供材料。主要研究結(jié)果如下：⑴抗蟲基因cry1Ia8植物表達載體的構(gòu)建。構(gòu)建了由帶有內(nèi)含子的組成型強啟動子Ubi調(diào)控的cry1Ia8基因植物表達載體，用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化。⑵農(nóng)桿

3、菌介導(dǎo)的玉米自交系遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立。對7個玉米自交系和4種培養(yǎng)基組的合進行篩選，選擇出了最適合誘導(dǎo)愈傷組織的自交系、培養(yǎng)基組合。其中B73(N6)和HiⅡB(NB)組合的初始愈傷誘導(dǎo)率和胚性愈傷誘導(dǎo)率分別為82.3％、73.9％和70.5％、63.8％，相比之下B73(N6)組合的誘導(dǎo)率和愈傷狀態(tài)都優(yōu)于HiⅡB(NB)組合，故選擇B73的愈傷組織作為遺傳轉(zhuǎn)化受體。對B73玉米胚性愈傷組織農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系進行了優(yōu)化，確立了較為較優(yōu)的