條件培養(yǎng)基對昆蟲細胞BTI-Tn5B1-4及克隆株特性的影響.pdf

1、本論文對目前國際上廣泛應用的BTI-Tn5B1-4細胞及其克隆株H5CL-B、H5CL-F分別進行了條件培養(yǎng)基的培養(yǎng).比較了細胞在含條件培養(yǎng)基和不含條件培養(yǎng)基SF900Ⅲ無血清培養(yǎng)基中的生長速率、病毒產量和重組蛋白表達水平.主要結果如下:
　　 1、細胞在兩種培養(yǎng)基的生長曲線測定顯示，BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F在含條件培養(yǎng)基的Sf-900Ⅲ中生長速度快，群體倍增時間短，分別為25.5h、25.5h、21

2、.9h，而在Sf-900Ⅲ中它們的群體倍增時間分別為30.3h、28.7h、24.2h。
　　 2、用AcMNPV-1A病毒分別對兩種培養(yǎng)基中的BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F細胞進行侵染。結果表明，細胞系在兩種培養(yǎng)基的病毒感染率都在93％以上，多角體產量兩種培養(yǎng)基間無明顯差異。
　　 3、重組蛋白β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）和堿性磷酸酶(secretedalkalinephosp

3、hatase，SEAP)的表達測定，結果表明，兩種培養(yǎng)基間的β-半乳糖苷酶表達量無明顯差異;細胞系BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F在CM中表達量高于在Sf-900Ⅲ的表達量，其中H5CL-F在CM中表達量最高（3.98×104IU/mL），大約比它在Sf-900Ⅲ的表達量提高10％。三種細胞系的堿性磷酸酶在CM中的表達量明顯高于在Sf-900Ⅲ中的表達量，其中BTI-Tn-5B1-4在CM的表達水平最高達(8.62I