東北地區(qū)豬鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素耐藥機(jī)制研究.pdf

1、豬鏈球菌病是分布范圍極廣的豬傳染病，世界各地均有發(fā)生，它不僅可引起豬的敗血癥、腦膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀，也可以傳染給人，導(dǎo)致人感染并死亡，是一種重要的人畜共患病病原。應(yīng)用抗菌藥物是防治該病的重要手段之一。因大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物同時(shí)對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌和支原體有廣譜的抗菌活性，毒副作用小、價(jià)格低廉，不僅在人醫(yī)臨床上作為一線用藥或聯(lián)合用藥制劑，而且在獸醫(yī)臨床上也廣泛應(yīng)用，亦可作為青霉素類(lèi)的替代藥物，獸醫(yī)臨床常用的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物有紅霉素、泰樂(lè)菌素等，對(duì)

2、治療豬鏈球菌有良好的作用。 但近年來(lái)一些國(guó)家均報(bào)道豬鏈球菌對(duì)紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的耐藥性呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，并且存在不同的耐藥機(jī)制及耐藥表型，從而對(duì)該病的治療構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。目前國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的豬鏈球菌大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)耐藥包括ermA, ermB, ermC, mefA以及23S rRNA和/或核糖體蛋白突變引起的耐藥，其中最常見(jiàn)的是ermB基因編碼的內(nèi)在型（cMLSB）耐藥。
　　 本試驗(yàn)從東北三?。ê邶埥?、遼寧、吉林）豬場(chǎng)采集

3、鼻腔棉拭子，采用傳統(tǒng)的病原分離方法如革蘭氏染色、生化反應(yīng)、血清分群等，分離鑒定了豬鏈球菌28株；通過(guò)微量稀釋法測(cè)定大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物敏感性，篩選耐藥菌株，并通過(guò)雙紙片擴(kuò)散法確定其耐藥表型。大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)對(duì)豬鏈球菌分離株的MIC范圍0.25 ~ >64μg/ml，紅霉素、阿奇霉素和泰樂(lè)菌素耐藥率分別為92.8％、92.8％和89.3％，其中，MIC> 64μg/ml的高水平耐藥株分別高達(dá)84.6％、84.6％和100％，以?xún)?nèi)在型耐藥表型（cMLS

4、B）為主。豬鏈球菌分離株對(duì)獸醫(yī)臨床常用的其他9種抗菌藥的耐藥率為35.7％ ~100％，耐藥率低于50％的只有氯霉素和環(huán)丙沙星，且均為3耐~ 9耐的多重耐藥株。揭示了本地區(qū)豬鏈球菌耐藥的嚴(yán)重性。
　　 通過(guò)PCR方法從分子生物學(xué)角度闡明豬鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的耐藥機(jī)制，擴(kuò)增耐藥基因erm（ermA, ermB, ermC）及mefA/E。ermA基因檢出率57.1％，ermB基因檢出率92.8％，同時(shí)含有ermA和ermB基

5、因的菌株占53.6％，沒(méi)有檢測(cè)到ermC和mefA/E基因，部分?jǐn)U增的erm序列已在GenBank中注冊(cè)。豬鏈球菌分離株ermA, ermB核苷酸序列與GenBank中肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌等的erm基因、轉(zhuǎn)座子、質(zhì)粒等具有高度的同源性，ermA基因的同源性為83％~100％，ermB基因的同源性為98％~100％，提示豬鏈球菌與人源及其他動(dòng)物源型細(xì)菌的erm基因可能存在廣泛的交換。ermA氨基酸序列與參照序列

6、（X03216.1）相比突變點(diǎn)較多，有11株豬鏈球菌的ermA氨基酸序列在34個(gè)位點(diǎn)處共同發(fā)生了改變；ermB氨基酸序列與參照序列（AY183117.1）相比突變點(diǎn)較少，有7株豬鏈球菌ermB氨基酸序列與參照序列完全一致，其余19株分別含有1~3個(gè)突變位點(diǎn)。說(shuō)明東北地區(qū)豬鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物的耐藥機(jī)制主要為抗生素作用靶位的甲基化，由甲基化酶基因ermA和/或ermB介導(dǎo)，ermA基因序列間變異較大，突變點(diǎn)較多，ermB基因序列相對(duì)保守