利用藍色溫和電泳分析鹽脅迫下水稻根尖質膜蛋白質組.pdf

1、以粳稻推廣品種徐稻三號為材料，通過兩相分配法提取根尖細胞高純度質膜，并利用 BN/SDS-PAGE電泳對鹽脅迫下水稻根尖質膜蛋白質進行了比較研究，結合LC-MS/MS質譜分析，鑒定了質膜蛋白質組中的脅迫響應蛋白；然后利用半定量RT-PCR對鑒定的蛋白質在轉錄水平的變化進行了分析，主要研究結果如下：
　　 1.鹽脅迫下水稻根尖質膜蛋白的BN/SDS-PAGE分析
　　 150mM NaCl處理水培水稻根尖發(fā)現(xiàn)鹽脅迫顯著抑制

2、根的生長，利用葡聚糖-聚乙二醇兩相分配法分離純化得到高純度質膜組分，并進行BN/SDS-PAGE分析，經(jīng)光密度掃描和定量分析，發(fā)現(xiàn)18個蛋白差異點，其中有7個蛋白質（包括膜通道蛋白，水孔蛋白，細胞質型蘋果酸脫氫酶，細胞色素P450，H+-ATPase，醛縮酶和烯醇化酶）在150mM NaCl處理24h和48h的脅迫條件下呈現(xiàn)下調表達，4個蛋白質（包括蛋白質二硫鍵異構酶，磷酸丙糖異構酶，蛋白酶體α亞基和GDP解離抑制蛋白）在24h和48h

3、呈現(xiàn)上調表達；還有4個蛋白質（包括谷胱甘肽S-轉移酶，14-3-3蛋白，血紅素過氧化物酶和蔗糖合成酶）在150mmol NaCI脅迫24h條件下，呈現(xiàn)上調表達，而在48h呈現(xiàn)下調表達。質譜鑒定表明18個被鑒定蛋白中有15個為質膜相關蛋白，來自其它細胞器的污染蛋白僅有3個，其中很多蛋白涉及很多重要的生理過程：（1）能量代謝，包括參與糖酵解途徑的果糖二磷酸醛縮酶同工酶C-1，磷酸丙糖異構酶以及烯醇化酶；調控UDPG產(chǎn)生的蔗糖合成酶。（2）離

4、子動態(tài)平衡，包括參與離子運輸?shù)腍+-ATPase；調節(jié)質膜H+-ATPase活性和離子通道控制的14-3-3蛋白以及水通道蛋白等。（3）細胞防御，包括參與活性氧清除的血紅素過氧化物酶和谷胱甘肽S-轉移酶等。
　　 2.鹽脅迫下水稻根尖質膜差異表達蛋白轉錄水平變化
　　 在上述基礎上利用半定量RT-PCR的方法對BN/SDS-PAGE分離鑒定的部分蛋白進行轉錄水平的研究。結果發(fā)現(xiàn)，大部分下調的蛋白在鹽處理時其mRNA的表達