日糧中添加卵黃抗體對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腹瀉及糞樣菌群的影響.pdf

1、腸毒素大腸桿菌（ETEC）是引起斷奶仔豬腹瀉的主要致病性大腸桿菌之一。本研究利用本實(shí)驗(yàn)室已建立的豬源腸毒素大腸桿菌（ETEC）菌毛基因型PCR分子鑒定方法，對(duì)湖北省武漢市中糧肉食品有限公司商品豬場(chǎng)進(jìn)行了ETEC菌毛基因型分布特征調(diào)查，確定了F18和K88是引起該豬場(chǎng)斷奶仔豬腹瀉的ETEC兩種最主要的菌毛蛋白基因型。從而針對(duì)性的在早期斷奶仔豬日糧中應(yīng)用由本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)基因工程技術(shù)將融合蛋白基因faeG-linker-fedF在大腸桿菌中表達(dá)

2、，并誘導(dǎo)產(chǎn)生制備的雙價(jià)卵黃抗體，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)研究該卵黃抗體在預(yù)防和控制斷奶仔豬腹瀉的作用效果，并進(jìn)一步研究該卵黃抗體對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及糞樣菌群的影響。結(jié)果如下：
　　 1．以ETEC標(biāo)準(zhǔn)菌株為試驗(yàn)材料，對(duì)試驗(yàn)豬場(chǎng)（湖北省武漢市中糧肉食品有限公司商品豬場(chǎng)）進(jìn)行ETEC流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果表明，通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增，標(biāo)準(zhǔn)菌株都可以擴(kuò)增出對(duì)應(yīng)的目的片段。對(duì)2008年348份來(lái)源于試驗(yàn)豬場(chǎng)新生仔豬（76份）、哺乳仔豬（87份

3、）和斷奶仔豬（185份）的腹瀉糞樣進(jìn)行了ETEC K88、K99、F18、F41及987P的PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，共有154份含有豬源致病性大腸桿菌菌毛基因K88、K99、987P、F41和F18中的一種或幾種，占腹瀉糞樣總數(shù)的44.25％。在這154份陽(yáng)性樣品中，120份含有F18菌，占77.92％，是最主要的一種菌毛基因型；檢出率僅次于F18的菌毛基因型是K88，其攜帶K88的樣品數(shù)有27份，占17.53％；另外，含F(xiàn)41的有15份

4、，占菌毛基因陽(yáng)性樣品總數(shù)的9.74％，K99的有3份，占1.95％；987P的有1份，占0.65％。本次調(diào)查結(jié)果還顯示其中12份樣品被檢測(cè)出同時(shí)攜帶有2種菌毛基因，其中7份共同攜帶K88和F18，占4.55％；2份同時(shí)攜帶K88和F41，占1.30％；2份同時(shí)攜帶K99和F18，占1.30％；還有1份攜帶F18和987P。以上結(jié)果表明，F(xiàn)18和K88是引起該豬場(chǎng)仔豬出現(xiàn)腸毒素大腸桿菌性腹瀉最主要的兩種菌毛基因型，適合利用本實(shí)驗(yàn)室制備的卵

5、黃抗體作針對(duì)性的應(yīng)用效果研究。
　　 2．通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)研究了由融合蛋白FaeG-FedF免疫獲得的噴霧干燥全蛋粉，添加于氨基酸平衡的斷奶仔豬日糧中對(duì)仔豬腹瀉及生長(zhǎng)性能的影響。試驗(yàn)選擇24±2d斷奶仔豬180頭，隨機(jī)分成3組，每組3個(gè)重復(fù)欄，20頭/欄。分別以添加3％血漿蛋白粉的日糧和添加1.5％普通全蛋粉的日糧為對(duì)照組，添加1.5％由融合蛋白FaeG-FedF免疫制備的高免全蛋粉的日糧為試驗(yàn)組。試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)各個(gè)階段，不同日

6、糧處理對(duì)斷奶仔豬腹瀉產(chǎn)生了顯著影響（P<0.01）。試驗(yàn)前期（0-14d），添加了含特異性卵黃抗體SDEP的融合蛋白FaeG-FedF組和普通全蛋粉組的腹瀉率顯著低于血漿蛋白粉組（P<0.01），添加特異性卵黃抗體組的腹瀉率與普通全蛋粉組相比差異不顯著。試驗(yàn)后期（15-28d），各組日糧一致，添加特異性卵黃抗體組和血漿蛋白粉組的腹瀉率顯著低于普通全蛋粉組（P<0.01），添加特異性卵黃抗體組的腹瀉率與血漿蛋白粉組相比差異不顯著。試驗(yàn)全期

7、（0-28d），添加特異性卵黃抗體組的腹瀉率顯著低于血漿蛋白粉組和普通全蛋粉組（P<0.01），添加血漿蛋白粉組的腹瀉率與普通全蛋粉組相比差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)各階段，不同日糧處理組的仔豬腹瀉指數(shù)也存在顯著差異（P<0.01），日糧中添加特異性卵黃抗體可以減輕斷奶仔豬的腹瀉程度。
　　 試驗(yàn)各階段所有日糧處理組仔豬均表現(xiàn)出較好的生長(zhǎng)速度，仔豬7周齡體重均能達(dá)到15kg以上，但各組之間不存在顯著差異（P>0.05）。試驗(yàn)

8、0-14d，各組的平均日增重、料肉比不存在顯著差異。此結(jié)果表明在仔豬斷奶后1-2周，日糧中添加普通全蛋粉和融合蛋白FaeG-FedF有利于促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，提高仔豬的飼料利用率，與日糧中添加血漿蛋白粉具有類似的作用效果。試驗(yàn)15-28d，所有試驗(yàn)仔豬停止飼喂添加SDPP或SDEP的日糧，而使用同一種日糧，結(jié)果顯示，血漿蛋白粉組和融合蛋白FaeG-FedF組的平均日增重顯著高于普通蛋白粉組（P<0.05），其中，血漿蛋白粉組達(dá)到極顯著水平（P

9、<0.01）。這一階段各組的料肉比也存在極顯著的差異，與普通全蛋粉相比，血漿蛋白粉組和融合蛋白FaeG-FedF組顯著降低（P<0.01）。在試驗(yàn)全期，血漿蛋白粉組和融合蛋白FaeG-FedF組的料肉比顯著低于普通全蛋粉組（P<0.05）。本試驗(yàn)各階段，各組的采食量均未出現(xiàn)顯著性差異。
　　 3．利用PCR/DGGE技術(shù)研究了融合蛋白FaeG-FedF免疫獲得的噴霧干燥全蛋粉，添加于氨基酸平衡的斷奶仔豬日糧中對(duì)斷奶仔豬糞樣菌群的

10、影響。在動(dòng)物試驗(yàn)過(guò)程中，分別采集血漿蛋白粉對(duì)照組、普通全蛋粉對(duì)照組和試驗(yàn)組仔豬斷奶當(dāng)天（試驗(yàn)前）及斷奶后7d和21d的糞樣，利用PCR/DGGE技術(shù)分析斷奶前后仔豬糞樣細(xì)菌區(qū)系的變化。糞樣細(xì)菌16s rDNA的V6-V8可變區(qū)經(jīng)PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DGGE電泳后再進(jìn)行條帶數(shù)、相似性和多樣性分析。結(jié)果表明，仔豬斷奶當(dāng)天糞樣細(xì)菌DGGE譜帶數(shù)較少，各組問(wèn)不存在顯著性差異（P>0.05）。但血漿蛋白粉組多樣性顯著高于普通全蛋粉組和高免全蛋粉

11、組（P<0.05），相似性分析顯示各組間仔豬糞樣菌群相似性低于30％，說(shuō)明仔豬斷奶前雖然有些細(xì)菌為所有仔豬共有，但是細(xì)菌菌群種類和數(shù)量差異較大；仔豬斷奶7d時(shí)高免全蛋粉組糞樣細(xì)菌DGGE譜帶數(shù)和多樣性均顯著高于斷奶當(dāng)天（P<0.05），而血漿蛋白粉組和普通全蛋粉組譜帶數(shù)和多樣性與斷奶當(dāng)天相比，不存在顯著性差異（P>0.05）。經(jīng)相似性分析發(fā)現(xiàn)，仔豬斷奶7d時(shí)DGGE圖譜屬于明顯的3簇，高免全蛋粉組、普通全蛋粉組和血漿蛋白粉組分別各為一簇

12、，其菌群相似性分別約為78％、80％和83％。高免全蛋粉組和血漿蛋白粉組細(xì)菌菌群多樣性指數(shù)顯著高于普通全蛋粉組（P<0.05）。說(shuō)明日糧對(duì)仔豬糞樣菌群有顯著的影響，飼喂同種日糧后，使菌群的種類趨于一致；仔豬斷奶21d，各組飼喂同一種日糧，與7d時(shí)DGGE圖譜相比，高免全蛋粉組和血漿蛋白粉組仔豬糞樣細(xì)菌多樣性顯著降低（P<0.05），普通全蛋粉組差異不顯著（P>0.05）。以上結(jié)果提示，高免全蛋粉添加于早期斷奶仔豬日糧中可以使仔豬糞樣菌群