葛銀口服液抗肉鴿熱應(yīng)激作用機(jī)制初探及葛根素代謝動力學(xué)測定.pdf

1、本研究以肉鴿為試驗動物建立了具有實踐指導(dǎo)意義的熱應(yīng)激模型.在此基礎(chǔ)上，研究中藥葛銀口服液對熱應(yīng)激肉鴿的保護(hù)機(jī)理及其血漿藥代動力學(xué)特點。試驗包括研究葛銀口服液對血液酶指標(biāo)和熱休克蛋白70 mRNA表達(dá)量的影響；比較分析了單味葛根和葛銀口服液中葛根素在鴿子體內(nèi)的血漿藥代動力學(xué)特點。
　　 葛銀口服液對熱應(yīng)激肉鴿血液酶活性的影響中藥可以緩解熱應(yīng)激的不良影響，改善血液生化水平。本試驗研究了葛銀口服液對熱應(yīng)激肉鴿血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT

2、）、堿性磷酸酶（ALP）、肌酸肌酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）的影響。結(jié)果表明，高溫應(yīng)激后，模型組肉鴿的ALT、CK和LDH高于常溫對照組，但是高溫用藥組的含量要低于模型組。高溫模型組中ALP比常溫對照組要低，高溫用藥組含量比模型組要略高些，但對其影響不大，說明葛銀口服液對熱應(yīng)激肉鴿ALP的調(diào)節(jié)作用不明顯.
　　 葛銀口服液對熱應(yīng)激肉鴿HSP70 mRNA表達(dá)量的影響熱休克蛋白是一種可使細(xì)胞非特異性損傷能力得到增強(qiáng)的保護(hù)性蛋白

3、。本試驗研究了葛銀口服液對熱應(yīng)激肉鴿熱休克蛋白70mRNA表達(dá)量的影響。首先，從組織中提取總RNA，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序、比對，測得的rg-576hsp70基因序列與日本鵪鶉HSP70（AB262971.1）序列比對，同源性為92％；與珍珠雞HSP70序列（AB096696.1）具有93％的同源性，證明RT-PCR產(chǎn)物的電泳條帶就是我們尋找的目的片段。在此基礎(chǔ)上，利用熒光定量PCR檢測肉鴿心臟和肝臟中HSP70 mRNA表達(dá)量。結(jié)果表明，

4、高溫用藥組肉鴿心臟、肝臟中的HSP70 mRNA含量顯著高于高溫模型組，表明中藥復(fù)方可以誘導(dǎo)肉鴿組織中HSP70mRNA表達(dá)量的增加，從而增強(qiáng)了肉鴿對高溫的耐受性。
　　 葛根素在肉鴿體內(nèi)的代謝動力學(xué)特點建立HPLC法測定單味葛根煎劑和葛銀口服液中葛根素在肉鴿體內(nèi)的24小時血藥濃度，通過藥動學(xué)參數(shù)變化來評價藥效的作用。色譜條件流動相為甲醇-0.1％醋酸水（27:73），流速1.0 ml·min-1，檢測波長250nm，柱溫為25

5、℃，并用3P87程序擬合藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)單味葛根和葛銀口服液灌胃15min后即可檢出血漿中的葛根素，最高血藥濃度出現(xiàn)在1.5-4小時.試驗結(jié)果表明，葛根素代謝在肉鴿體內(nèi)符合二室開放模型分布，單味葛根和葛銀口服液中的葛根素在肉鴿體內(nèi)都呈現(xiàn)吸收快、消除慢的特點；相比之下，葛銀口服液中的葛根素藥物分布半衰期t1/2α變長，消除半衰期t1/2β變短，最高血藥濃度的時間tmax提前，最高血藥濃度cmax變大，表明了葛銀口服液中的葛根素在肉鴿體