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文檔簡介
1、鈣離子通道是由多個亞單位組成的多基因家族復(fù)合體,參與機(jī)體代謝,具有重要的生理功能;其中α;亞單位作為電壓感受器,具有離子選擇性,能為鈣拮抗劑等多數(shù)藥物提供結(jié)合位點(diǎn)并形成跨膜的親水通道,是最重要的亞單位,其編碼基因(CACNA1S)突變會導(dǎo)致人低鉀性周期性麻痹和惡性高溫綜合征。人的CACNA1S基因被定位在1號染色體(1q31-32),而對于豬和其它動物尚未見報道。應(yīng)用輻射雜種細(xì)胞系(RH panel)進(jìn)行基因定位是繼熒光原位雜交技術(shù)(F
2、ISH)后新近發(fā)展起來的一種有效的基因定位方法;該法簡便易行,結(jié)果直觀,能快速準(zhǔn)確地提供可靠的基因定位信息。本研究根據(jù)人CACNA15基因3'端非翻譯區(qū)序列設(shè)計(jì)引物,對豬基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測序,與人相應(yīng)序列作同源性比較;然后采用IMpRHpanel將CACNA1S基因定位于豬10p11-12。 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)人CACNA1S基因序列設(shè)計(jì)引物,通過RT-PCR和跨內(nèi)含子擴(kuò)增等方法得到豬CACNA1S基因約5380 bp序列,
3、其中外顯子部分為2000 bp,內(nèi)含子部分約3380bp,經(jīng)與人該基因相應(yīng)部分外顯子序列比較,同源性為64.6%-97.4%。運(yùn)用PCR-SSCP技術(shù)對其中3045 bp的DNA序列進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)56個SNP突變點(diǎn),其中外顯子序列(1342bp)25個,內(nèi)含子序列(1703 bp)31個。在10個檢測片斷中:由引物對1S-47和1S-73所擴(kuò)增片斷未檢測到多態(tài)SNP位點(diǎn);其余引物對擴(kuò)增片斷均具有較好的多態(tài)性;根據(jù)三個多
4、態(tài)的SNP's位點(diǎn),設(shè)計(jì)了三個PCR-RFLP檢測方法,并進(jìn)行了基因型檢測。 采用一般線性模型法分析了各基因位點(diǎn)對豬胴體性狀及肉質(zhì)性狀的遺傳效應(yīng),結(jié)果顯示:位點(diǎn)1S-46對系水力存在極顯著的影響(P<0.01),對肉色(L)、眼肌面積存在顯著的影響(0.01
5、D基因型,BD基因型顯著性地大于DD基因型, BB基因型對眼肌面積的影響顯著地大于BC、CC、DD基因型,CD基因型顯著地大于DD基因型;位點(diǎn)1S-74對后腿重、背膘厚(中)和系水力均存在極顯著的影響(P<0.01),對頭重的影響也較大;其中AA、AB基因型對后腿重的影響顯著地大于AE基因型,AC基因型對背膘厚(中)的影響顯著地大于AA、AB、AD、AE基因型,AC、AD、AE基因型對系水力的影響顯著地大于AB基因型。位點(diǎn)1S-61對后
6、腿重存在極顯著的影響(P<0.01),對活重的影響較大:其中AB基因型對后腿重的影響顯著性地大于BC、CC基因型,AA基因型顯著性地大于BB基因型。位點(diǎn)1S-64對大腿溫度存在極顯著性的影響(P<0.01),對眼肌溫度存在顯著性影響(0.01
7、P<0.05),其中AA基因型顯著性地大于AB、AC、BB基因型。位點(diǎn)1S-72對后腿重存在極顯著性的影響(P<0.01),對后腿肌肉重和背膘厚(前)影響較大;其中DD基因型對后腿重的影響顯著性地大于AA基因型,AA、AB基因型顯著性大于CC基因型:對后腿肌肉重的影響以DD基因型顯著性大于AA基因型,對背膘厚(前)的影響以BB基因型顯著性地大于CC基因型,DD基因型顯著性的大于AA、CC基因型。酶切位點(diǎn)Ec072 I對后腿肌肉重和肉色(
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