納米氧化鋅對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞能量蛋白代謝的影響及氧化損傷的保護(hù)作用.pdf

1、本試驗(yàn)以原代培養(yǎng)小鼠腸上皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究了納米氧化鋅對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞能量蛋白代謝以及對(duì)氧化損傷的保護(hù)作用。研究共包括兩個(gè)試驗(yàn)：試驗(yàn)一、不同粒徑及濃度納米氧化鋅對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞能量蛋白代謝的影響；試驗(yàn)二、不同粒徑及濃度納米氧化鋅對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。
　　 試驗(yàn)一將三種粒徑(10-15、50、100nm)的納米氧化鋅，分別設(shè)7個(gè)處理，按單因素設(shè)計(jì)，分別在原代培養(yǎng)小鼠腸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)液中添加濃度為0、0.5、1、

2、2、4、6、8μgml-1同一粒徑的納米氧化鋅，處理時(shí)間24h。結(jié)果表明：濃度在0.5-6μgml-1的10-15nm氧化鋅能顯著(P＜0.05)提高小鼠腸上皮細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)、琥珀酸脫氫酶(SDH)、Na+,K+-ATP酶活力，表明納米氧化鋅對(duì)細(xì)胞能量代謝具有促進(jìn)作用。隨納米氧化鋅添加濃度的提高，細(xì)胞MTTOD值、細(xì)胞總蛋白含量、培養(yǎng)上清液NH3含量、細(xì)胞金屬硫蛋白(MT)含量、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、γ-

3、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)的活力也顯著(P＜0.05)升高，表明納米氧化鋅能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，增強(qiáng)細(xì)胞蛋白代謝相關(guān)酶活，提高細(xì)胞蛋白質(zhì)的沉積。除細(xì)胞MT、Na+,K+-ATP酶、培養(yǎng)上清液NH3含量外，8μgml-1的10-15nm氧化鋅能顯著地降低上述指標(biāo)(P＜0.05)，表明較高濃度納米氧化鋅對(duì)細(xì)胞能量和蛋白代謝具有負(fù)面影響。50nm和100nm的氧化鋅對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞能量蛋白代謝的影響與10-15nm氧化鋅相似。相同濃度下，納米氧化鋅的

4、粒徑越小，生物活性越高。以MTTOD值作為評(píng)價(jià)細(xì)胞生長(zhǎng)的指標(biāo)，三種粒徑（10-15、50、100nm）納米氧化鋅的最適添加濃度分別為：4.95、5.29和5.67μgml-1。
　　 試驗(yàn)二將三種粒徑(10-15、50、100nm)的納米氧化鋅，分別設(shè)7個(gè)處理，按單因素設(shè)計(jì)，分別在原代培養(yǎng)小鼠腸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)液中添加濃度為0、0.5、l、2、4、6、8μgml-1同一粒徑的納米氧化鋅，并加入終濃度為200μmolL-1的過(guò)氧化氫

5、(H2O2)。陰性對(duì)照組常規(guī)培養(yǎng)，不加納米氧化鋅及H2O2，培養(yǎng)時(shí)間均為24h。結(jié)果表明：細(xì)胞用200μmolL-－1的H2O2處理后，細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力和細(xì)胞MTTOD值極顯著(P＜0.01)低于對(duì)照組，而培養(yǎng)液中LDH和丙二醛(MDA)含量極顯著(P＜0.01)高于對(duì)照組，表明細(xì)胞受到顯著的氧化損傷。添加0.5μgml-1至6μgml-1的10-15nm氧化鋅

6、能顯著(P＜0.05)提高細(xì)胞MTTOD值；顯著(P＜0.05)降低培養(yǎng)液中LDH和MDA含量，表明納米氧化鋅能保護(hù)小鼠腸上皮細(xì)胞的完整性，減少細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，減輕細(xì)胞的氧化損傷。添加0.5μgml-1到6μgml-1的10-15nm氧化鋅顯著(P＜0.05)提高細(xì)胞SOD、CAT和GSH-Px活力。表明納米氧化鋅能維持細(xì)胞的抗氧化酶活，提高細(xì)胞抗氧化的能力。但8μgml-1的10-15nm氧化鋅能極顯著(P＜0.01)降低細(xì)胞MT

7、TOD值、SOD、CAT和GSH-Px活力：極顯著(P＜0.01)增加培養(yǎng)液LDH和MDA的含量，說(shuō)明高濃度的納米氧化鋅不能減輕細(xì)胞的氧化損傷。50nm和100nm的氧化鋅對(duì)小鼠腸上皮上述指標(biāo)的影響與10-15nm氧化鋅相似，相同濃度下，納米氧化鋅的粒徑越小，生物活性越高。0-15、50、100nm納米氧化鋅發(fā)揮對(duì)細(xì)胞氧化損傷最大保護(hù)作用以MDA為評(píng)價(jià)指標(biāo)的濃度分別為3.97μ.gml-1、4.15μgml-1和4.28μ.gml-1。