青島流清河灣扇貝養(yǎng)殖籠大型污損生物的掛板調(diào)查和櫛孔扇貝(Chlamys farreri)卵黃蛋白原基因cDNA全長的克隆及表達分析.pdf

1、海洋環(huán)境中，具有附著生長習性的生物如藻類、海綿、水螅、藤壺、苔蘚蟲、貝類、海鞘等，經(jīng)常出現(xiàn)在船舶、浮筏、網(wǎng)籠、網(wǎng)箱及其它海中設施的表面上，給人類的生產(chǎn)和生活造成不利影響，故將這些生物稱為海洋污損生物(marinefoulingorganisms)。它產(chǎn)生的危害不可小覷，尤其在水產(chǎn)業(yè)中，海洋污損生物會影響?zhàn)B殖物種的正常生長，甚至造成大量死亡，還會加速養(yǎng)殖設施的老化，所以有必要對其進行廣泛而深入的研究。 2006年9月～2007年8

2、月，作者于青島流清河灣扇貝養(yǎng)殖籠上進行了周年污損生物的人工掛板實驗，共記錄大型污損生物65種，優(yōu)勢種有：石莼、緣管滸苔、多管藻、太平洋牡蠣、紫貽貝、大室膜孔苔蟲、莫氏二段海鞘。主要附著期在5～11月，月板最大濕重出現(xiàn)在9月，為637.46g/m2；季板最大濕重出現(xiàn)在秋季，為3121.28g/m2；半年板最大濕重出現(xiàn)在下半年(9～2月)，為5924.57g/m2；年板濕重為3551.58g/m2。從污損生物種類的垂直分布看，表層板以藻類、

3、端足類為主，底層板以雙殼類、海鞘等污損動物為主；從全年的物種多樣性變化看，夏、秋季物種數(shù)多于冬、春季，秋季群落的均勻程度低于其它三季。本文還探討了下水季節(jié)、周期及物種依賴關系對污損生物群落的影響，初步擬出一年周期里污損生物群落的演替過程，認為微生物粘膜形成后，污損生物群落開始步入中期階段并繼續(xù)發(fā)展，它歷經(jīng)貝類、藻類、端足類、水螅等生物的相繼出現(xiàn)與消亡，在年板上形成以紫貽貝為優(yōu)勢的復雜群落，但該群落還未達到最終的穩(wěn)定階段。 卵黃蛋

4、白原(vitellogenin，VTG)是卵黃蛋白(vitellin，VT)的前體，一直以來備受人們的關注。對于卵生動物來說，卵黃物質(zhì)的形成與積累是卵子發(fā)生過程中的重要事件。卵黃蛋白是卵黃物質(zhì)的最主要成分，為卵母細胞和胚胎的發(fā)育提供了大量營養(yǎng)，行使著重要的生物學功能，因此作為卵黃蛋白前體的卵黃蛋白原，具有很高的科研價值，并且在脊椎動物、昆蟲、甲殼動物中，業(yè)已得到廣泛而深入的研究。然而在軟體動物中，相關的研究還顯不足，尤其是對卵黃蛋白原的

5、來源仍存在爭議。本研究選取我國重要的水產(chǎn)經(jīng)濟物種，櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)為研究對象，采用同源克隆的策略和cDNA末端快速擴增(rapid-amplificationofcDNAends，RACE)技術(shù)獲得了櫛孔扇貝Cf-vtg全長cDNA序列，對其序列特征進行了分析，同時借助半定量RT-PCR和原位雜交技術(shù)研究了Cf-vtg基因的時空表達情況，并最終確定了Cf-vtg基因在成體櫛孔扇貝中的表達位點。實驗最后，還對外源的

6、雌激素對Cf-vtg基因的誘導作用進行了初步探索。 克隆得到的Cf-vtg基因cDNA序列全長7604bp，開放閱讀框(openreadingframe，ORF)長6888bp，編碼2296個氨基酸殘基。存在一個被類枯草桿菌內(nèi)切蛋白酶(subtilisin-likeendoproteases)識別的R-X-R/K-R序列。由該基因推導的櫛孔扇貝VTG一級結(jié)構(gòu)與蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)VTG的相似性

7、最高，達89％，與其它軟體動物、魚類、甲殼動物和線蟲等的VTG也均表現(xiàn)出相似性，尤其在N-末端。 半定量RT-PCR分析顯示，Cf-vtg基因主要在卵巢表達，肝胰腺有微弱表達，精巢和其它組織均無表達，并且Cf-vtg基因表達量隨著卵巢的成熟而逐漸降低。原位雜交結(jié)果表明陽性信號定位在卵母細胞周圍的濾泡細胞中，但在肝胰腺中沒有檢測到陽性信號產(chǎn)生。故此我們得出結(jié)論櫛孔扇貝卵巢的濾泡細胞是Cf-vtg基因的表達位點。至于在肝胰腺RT-P