豬細小病毒W(wǎng)H-1株疫苗病毒增殖培養(yǎng)條件優(yōu)化研究.pdf

1、本研究用豬細小病毒W(wǎng)H-1株試制疫苗，在遵循《豬細小病毒(WH-1株)滅活疫苗生產(chǎn)與檢驗規(guī)程》的前提下，通過對一系列影響病毒效價的因素進行優(yōu)化，最終確定了最優(yōu)的病毒增殖培養(yǎng)條件。
　　 不同細胞系對病毒效價的影響：用IBRS-2細胞與PK-15細胞分別接毒，結(jié)果表明豬細小病毒W(wǎng)H-1株在IBRS-2與PK-15細胞上生長增殖收獲的病毒效價沒有顯著差異(P＞0.05)。豬細小病毒W(wǎng)H-1株適合在IBRS-2與PK-15細胞上生長增

2、殖，但IBRS-2更容易傳代，所以選擇其進行下一步試驗。
　　 不同培養(yǎng)方法對病毒效價的影響：用靜置培養(yǎng)的IBRS-2扁瓶細胞4瓶和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的轉(zhuǎn)瓶細胞4瓶分別接毒，結(jié)果表明扁瓶靜置培養(yǎng)方法收獲的病毒效價顯著高于轉(zhuǎn)瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)方法(P＜0.05)。但是從生產(chǎn)角度上說，轉(zhuǎn)瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)更適用，因此選擇轉(zhuǎn)瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)進行下一步試驗。
　　 不同體積培養(yǎng)液對病毒效價的影響：用IBRS-2細胞接種豬細小病毒W(wǎng)H-1株，各試驗組加入培養(yǎng)液體

3、積分別為1000ml/瓶、1200ml/瓶、1500ml/瓶。結(jié)果表明每瓶加入1000ml培養(yǎng)液收獲的病毒液效價最低，顯著低于1200ml和1500ml(P＜0.05)，而每瓶加入1200ml和1500ml培養(yǎng)液收獲的病毒液效價沒有顯著差異(P＞0.05)。但是從生產(chǎn)實踐來看，每瓶加入1500ml的產(chǎn)量更高，能夠提高生產(chǎn)效能。
　　 培養(yǎng)液中不同血清濃度對病毒液效價影響：用IBRS-2細胞接種豬細小病毒W(wǎng)H-1株，各試驗組加入培

4、養(yǎng)液的血清濃度分別加入8％、10％、12％。結(jié)果表明培養(yǎng)液的血清濃度為8％收獲的病毒液效價顯著低于10％和12％收獲的病毒液(P＜0.05)，但10％和12％兩者收獲的病毒液效價無顯著差異(P＞0.05)。從節(jié)約生產(chǎn)成本和提高疫苗品質(zhì)的角度來說，應該選擇10％。
　　 不同生長時間的細胞對病毒效價的影響：分別選取生長24h、48h、72h的IBRS細胞接毒，結(jié)果表明生長時間為24h的細胞所產(chǎn)病毒效價顯著低于生長時間為72h的細胞

5、(P＜0.05)，而生長時間為72h的細胞病毒效價顯著低于生長時間為48h的細胞(P＜0.05)。由此可見，選擇生長時間為48h的細胞進行接毒，可以獲得效價最高的病毒液。
　　 病毒液的免疫原性測定：在試驗生產(chǎn)的病毒液中，選擇效價達到規(guī)程標準要求（105.5TCID50/ml）的病毒液6批，并分為效價較低組和效價較高組，兩者病毒效價差異顯著(P＞0.05)。將上述挑選的病毒液分別進行滅活、配苗和乳化，分別用豚鼠和豬進行免疫原性測