豬細小病毒和豬偽狂犬病毒實時定量PCR檢測方法的建立.pdf

1、黑龍江八一農墾大學碩士學位論文豬細小病毒和豬偽狂犬病毒實時定量PCR檢測方法的建立姓名：曹滌非申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：楊玉英20070401A b s t r a c tP a r v o v i r u sa n dP s e u d o r a b i e si n f e c t i o no fs w i n ec a l l C a U S es i g n i f i c a n c te c o n o

2、 m i cl o s e s i nS W i n ei n d u s t r i e sw o r l d ．w i d e ．S i n c e c o n v e n t i o n a li m m a n o l o g i c a lm e t h o d sf o rd e t e c t i o no f t h e s ev i r a l d i s e a s e s t a k e l o n g e r t

3、 i m e f o r t e s t i n g w i t h r e l a t i v e l y l o w e r d i a g n o s t i c s e n s i t i v i t y a n ds p e c i f i c i t ya n dc o n v e n t i o n a lP C R h a sr e l a t i v e l yl o w e rs p e c i f i c i t

4、y , a r a p i d ，p r e c i s ea n ds e n s i t i v ed i a g n o s t i c m e t h o d i s n e e d e d f o re p i d e m i o l o g i c a l i n v e s t i g a t i o n a n dl a b o r a t o r y d i a g n o s i s ．T h er e a l -

5、t i m eq u a n t i t a t i v eP C R i s p o w e r f u ld i a g n o s t i ct o o lw i t h h i g h e l “ s p e c i f i c i t ya n ds e n s i t i v i t ya n dc a n b eu s e d t or a p i d l y d e t e c tc o p i e so f t h e

6、 v i r u si nt e s t i n g s a m p l e s ．A c c o r d i n g t ot h en u e l e o t i d e s e q u e n c e sp u b l i s h e di nG e r t a a n k , s p e c i f i cp d m e l t 3a n dp r o b e sw e r ed e s i g n e d ．T h es t

7、a n d a r dc u r v 髂w e r eo b t a i n e da c c o r d i n g t ot h eC t v a l u e s o b t a i n e df r o mt h er e a l ·t i m eP C R ．T w oR e a l - t i m e q u a n t i t a t i v eP C R m e t h o d s w e r ed e v e

8、l o p e d t od e t e c tP P V - N S l g a n e ，P R V - g Dg e n e a n dP R V - g Eg e n e ．F o re v a l u a t i n gT a q m a nr e a l - t i m e q u a n t i t a t i v eP C R t o t a l o f2 2b l o o ds a m p l e sa n d8t i

9、 s s u es a m p l e sf r o ml y m p h n o d e s w e r e t e s t e d ．O u to f 2 2b l o o d s a m p l e s t e s t e d ，1 9w e r e p o s i t i v ef o rP P Vb yt r a d i t i o nP C R a n d2 0w e r ep o s i t i v e b yT a q

10、m a n r e a l ·t i m eq u a n t i t a t i v eP C I LA l ls a m p l e sw e r en e g a t i v ef o rP R V b yb o t hm e t h o d s ．O u t o f 8t i s s u e s a m p l e s , 5 w e g ep o s i t i v ef o rP R V v a c c i n e

11、s t r a i n ,i nw h i c h4w e r ep o s i t i v ef o rP R V w i l ds t r a i na n d 3w e r e P P V p o s i t i v ed e t e c t e db y t h et r a d i t i o na n d T a q m a nr e a l ·t i m eq u a n t i t a t i v e P C

12、I LT h e r e s u l t s s h o w e dt h a tt h er e a l - t i m eq u a n t i t a t i v eP C Ra s s a yd e v e l o p e di n t h i ss t u d yi sar a p i d ，s p e c i f i ca n ds e n s i t i v e m e t h o df o rd e t e c t i