牛MSCs核移植胚胎發(fā)育潛能的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)通過貼壁篩選法分離培養(yǎng)牛骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，對(duì)分離培養(yǎng)的牛MSCs生物學(xué)特性進(jìn)行了分析，并以牛MSCs為供核細(xì)胞進(jìn)行了核移植實(shí)驗(yàn)，研究了牛MSCs核移植重構(gòu)胚的體外發(fā)育能力，同時(shí)還對(duì)比研究了不同種類供體核的核移植重構(gòu)胚在囊胚細(xì)胞數(shù)上的差異。最后進(jìn)行胚胎移植，探討了不同供體細(xì)胞對(duì)牛核移植重構(gòu)胚移植后妊娠率的影響。實(shí)驗(yàn)取得以下結(jié)果:
　　 1、經(jīng)純化培養(yǎng)后的牛MSCs形態(tài)均一，呈成纖維表型克隆樣生長，瑞氏-吉姆薩染

2、色可見細(xì)胞核較大，多為卵圓形，核仁明顯，大多數(shù)細(xì)胞有2-4個(gè)核仁。堿性磷酸酶(AKP)染色，可見細(xì)胞呈弱陽性，說明分離得到的MSCs是一群比較原始的細(xì)胞。
　　 2、分別用切割法和抽吸法來獲取卵母細(xì)胞，切割法所收集的可用卵母細(xì)胞數(shù)顯著多于抽吸法(P＜0.05)，培養(yǎng)后卵母細(xì)胞成熟率低于抽吸法但差異不顯著。
　　 3、牛卵母細(xì)胞成熟液中分別添加FSH(10μg/L)、ITS(10μl/mL)、EGF(10μg/L)，配成3

3、種不同體外成熟液分別對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，F(xiàn)SH組第一極體排出率84.2％高于ITS和EGF組，差異顯著。ITS組第一極體排出率75.9％高于EGF組70.2％，但差異不顯著。
　　 4、分別以牛MSCs，MCs，MECs為供體核進(jìn)行核移植，MSCs組桑葚胚率（50.4±1.2％）高于MCs組（42.7±0.6％）(P＞0.05)和MECs組（32.1±0.9％）(P＜0.05)，囊胚率（37.2±0.4％）顯著高于MCs組（21

4、.1±0.8％）和MECs組（20.4±0.6％）(P＜0.05)。
　　 5、對(duì)比三種供體細(xì)胞的核移植囊胚細(xì)胞數(shù)，MSCs組核移植重構(gòu)胚平均細(xì)胞數(shù)（103±1.7）高于MCs組（87±2.4）和MECs組（76±3.2），接近超排胚胎（對(duì)照組）的細(xì)胞數(shù)（112±4.8）。
　　 6、對(duì)不同供體核的核移植囊胚進(jìn)行胚胎移植，胚胎移植后的MSCs組胚胎在妊娠的30～90天妊娠率高于MCs組和MECs組，差異顯著。