三種早熟水稻變異株系的AFLP分析.pdf

1、利用離子束介導(dǎo)技術(shù)，將玉米“鄭單14”的DNA片段直接導(dǎo)入受體水稻“豫粳6號(hào)”中，獲得大量變異材料。經(jīng)多代選育，得到一批性狀差異明顯，且能穩(wěn)定遺傳的水稻變異株系。本實(shí)驗(yàn)選取3個(gè)成熟期比對(duì)照水稻“豫粳6號(hào)”提前25-28天，已穩(wěn)定遺傳4代的水稻早熟變異株系：09-6-121-6-1-1-1(用A表示)、09-6-121-6-1-1-2(用B表示)和09-6-121-10-7-5-1(用C表示)作為研究材料。
　　 利用多態(tài)性豐富、

2、靈敏度高、穩(wěn)定性好的AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，以64對(duì)選擴(kuò)引物對(duì)3種早熟變異株系及其陽(yáng)性對(duì)照玉米和陰性對(duì)照水稻的基因組DNA進(jìn)行多態(tài)性分析。AFLP擴(kuò)增結(jié)果顯示，3種早熟變異株系與陰性對(duì)照豫粳6號(hào)的AFLP擴(kuò)增圖譜相似率分別為85.8．％、87.4％和84.6％，說(shuō)明變異株系A(chǔ)、B和C與對(duì)照豫粳6號(hào)基因組DNA存在顯著差異。變異株系A(chǔ)共擴(kuò)增出966條DNA條帶，差異帶90條，差異帶中新增帶55條，缺失帶28條，目的帶7條，差異比例為9.3％

3、；變異株系B共擴(kuò)增出963條DNA帶，差異帶81條，差異帶中新增帶51條，缺失帶22條，目的帶8條，差異比例為8.4％；變異株系C共擴(kuò)增出974條DNA帶，差異條帶98條，差異帶中新增帶59條，缺失帶31條，目的帶8條，差異比例為10.1％。差異帶的出現(xiàn)，說(shuō)明經(jīng)離子束介導(dǎo)玉米DNA轉(zhuǎn)化處理后變異株系基因組DNA發(fā)生了變化。通過(guò)相似性分析發(fā)現(xiàn)，變異株系A(chǔ)、B、C及陰性對(duì)照水稻CK2與陽(yáng)性對(duì)照玉米CK1之間的AFLP擴(kuò)增圖譜相似率分別為19

4、.9％、20.1％、20.0和18.8％，表明變異株系與陽(yáng)性對(duì)照玉米基因組之間的相似性高于陰性對(duì)照豫粳6號(hào)。
　　 將AFLP指紋圖譜中的部分新增帶進(jìn)行回收、克隆并測(cè)序，然后將得到的序列信息在NCBI基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blast檢索分析。選擴(kuò)引物P6M4在變異株系A(chǔ)中擴(kuò)增到一條長(zhǎng)度為494bp的新增序列，在3′端檢索到一段覆蓋率為75％，相似率為100％，來(lái)自6號(hào)染色體的粳稻序列與之匹配，在5′端檢索到一段覆蓋率24％，相似率為

5、99％，來(lái)自11號(hào)染色體的粳稻序列與之匹配，這表明受體水稻發(fā)生了染色體易位，可能由于離子注引起DNA鏈斷裂，在DNA重組修復(fù)過(guò)程中導(dǎo)致染色體變異的發(fā)生?；厥盏钠渌略鰩г诨蚪M數(shù)據(jù)庫(kù)中都能檢索到高度匹配的水稻序列，且存在個(gè)別堿基的差異，出現(xiàn)單核苷酸多態(tài)性，這可能是離子束介導(dǎo)使受體水稻基因組DNA個(gè)別堿基發(fā)生變異的結(jié)果。
　　 克隆并測(cè)序了4個(gè)選擴(kuò)引物(P6M4、P6M8、P7M1和P8M4)中的目的帶，利用DNAman軟件對(duì)獲得

6、的序列進(jìn)行相似性比對(duì)分析，并在NCBI基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blast檢索分析。結(jié)果顯示，選擴(kuò)引物P6M8在3個(gè)變異株系A(chǔ)、B和C中均擴(kuò)增到一段長(zhǎng)度為190bp的目的序列，該目的序列在基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索到相似率為97％的水稻序列和相似率為90％的玉米序列與之匹配，并且水稻和玉米中都編碼NADH脫氫酶相關(guān)亞基，表明引物P6M8在三種早熟變異株系中擴(kuò)增到的目的序列可能為水稻和玉米間的同源序列。3個(gè)變異株系中擴(kuò)增到的其他目的序列與陽(yáng)性對(duì)照玉米