水稻OsMPK14基因的克隆及其特征分析.pdf

1、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是在真核生物中普遍存在的一類絲氨酸/蘇氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶，是MAPK級聯(lián)通路的重要組分。有研究顯示，MAPK參與了生物及非生物脅迫應(yīng)答、激素反應(yīng)、細胞分化的調(diào)控和發(fā)育過程。
　　 本實驗室通過cDNA文庫篩選的方法，從水稻幼穗中克隆了潛在的OsMPK14基因的cDNA片段-OsRP19(GenBank登錄號為FJ9196

2、00)。本研究進一步通過序列比對拼接，結(jié)合RT-PCR方法克隆了該基因長度為1660bp的cDNA序列(GeneBank登錄號為GO265780)，其中包含1629bp的ORF，編碼542個氨基酸。蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析提示，第12～304位氨基酸對應(yīng)一個典型的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶結(jié)構(gòu)域。cDNA序列在水稻基因組數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果顯示,該基因位于水稻第5號染色體上，編碼區(qū)由9個外顯子和8個內(nèi)含子組成。系統(tǒng)進化分析顯示，OsMPK14屬于水稻M

3、APK家族的E組。
　　 采用半定量RT-PCR分析OsMPK14表達模式，結(jié)果顯示OsMPK14在水稻幼苗的根和地上部分均有表達，不具有明顯的組織特異性，說明水稻OsMPK14可能在多種組織中發(fā)揮作用。分別以鹽脅迫、ABA、低溫、干旱和光照處理水稻根和地上部分,半定量RT-PCR結(jié)果顯示，OsMPK14可能參與了水稻對鹽害和低溫的脅迫應(yīng)答，并且處于激素ABA的調(diào)控之下，且OsMPK14在水稻地上部分的表達可能受光照的負調(diào)控，而

4、在根中的表達則受到光的正調(diào)控。
　　 采用RNA原位雜交分析OsMPK14在水稻葉片和幼穗中的分布，結(jié)果表明OsMPK14主要分布在葉片的葉肉細胞中，并在雌雄蕊形成期的水稻幼穗中廣泛分布，OsMPK14轉(zhuǎn)錄本的分布特點提示，該基因與水稻的生長發(fā)育關(guān)系密切。
　　 構(gòu)建了OsMPK14的原核表達載體pET28(a)-OsMPK14，并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達出與組氨酸標(biāo)簽融合的OsMPK14蛋白，為進一步制備抗體，研究OsMP