SSR標(biāo)記在馬氏珠母貝系譜鑒定、有效親本估計(jì)及性狀關(guān)聯(lián)分析中的應(yīng)用.pdf

1、馬氏珠母貝(Pinctada martensii)是我國(guó)海水珍珠生產(chǎn)的主要貝種，已有40多年的大規(guī)模養(yǎng)殖，但還沒有培育出優(yōu)良的養(yǎng)殖品種，致使養(yǎng)殖群體性狀退化，導(dǎo)致我國(guó)海水珍珠質(zhì)量明顯降低、國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力下降。因此加強(qiáng)遺傳育種的基礎(chǔ)研究和分子標(biāo)記輔助育種的應(yīng)用研究，培育出生長(zhǎng)快、個(gè)體大、育珠性狀好的珍珠貝品種具有重要意義。
　　以馬氏珠母貝選育系F3為親本，建立了36個(gè)家系，按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行幼體培育和海區(qū)養(yǎng)成。7個(gè)月后，隨機(jī)選取4個(gè)家系

2、，每個(gè)家系取樣30個(gè)個(gè)體，利用篩選的微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分析候選家系的遺傳結(jié)構(gòu)和系譜。結(jié)果表明：(1)13個(gè)微衛(wèi)星引物在四個(gè)家系中共檢測(cè)到39個(gè)等位基因，每個(gè)位點(diǎn)的等位基因數(shù)在2～5之間，四個(gè)家系的平均觀測(cè)雜合度(Ho)為0.531～0.597，平均期望雜合度(He)為0.474～0.507；(2)根據(jù)子代基因型成功的推斷出四個(gè)家系的親本基因型。以標(biāo)記PM142為例，通過子代基因型推斷出3＃、4＃、5＃及10＃四個(gè)家系雙親的基因型

3、分別為116/112×116/112、122/112×116/112、116/112×112/103、122/112×116/112，隨著標(biāo)記數(shù)量的增多，可據(jù)此鑒別各個(gè)家系；用UPGMA法對(duì)120個(gè)樣本進(jìn)行聚類分析，98.3％的同一家系的子代個(gè)體能夠聚到一起，分類結(jié)果與系譜來源基本一致。結(jié)果說明，這四個(gè)家系具有較高的遺傳多樣性，但家系間己出現(xiàn)明顯的遺傳分化。由于此方法首次成功應(yīng)用在珍珠貝，為該物種群體系譜分析提供了一種新的便捷途徑。

4、r>　　從快速生長(zhǎng)系F3選擇親本進(jìn)行群體繁殖，雌雄親本數(shù)量分別為42和38個(gè)，人工解剖受精，按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行幼體培育和海區(qū)養(yǎng)殖。從子代隨機(jī)選取90個(gè)幼體，利用45對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分析其遺傳結(jié)構(gòu)和有效親本數(shù)量。結(jié)果共檢測(cè)到45個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，186個(gè)等位基因，每個(gè)位點(diǎn)的等位基因數(shù)在2～9之間，平均每個(gè)位點(diǎn)有4.13個(gè)等位基因。平均觀察雜合度為0.543；平均Shannon多樣性指數(shù)為1.012；平均PIC值為0.491。根據(jù)基

5、因頻率的似然率算法成功的推斷出該群體含有30個(gè)全同胞家系，有效親本數(shù)量為60個(gè)，有75％的親本參與了繁殖。世代之間近交系數(shù)增量△F=0.83％，F(xiàn)4代群體的近交系數(shù)F=3.27％。本研究結(jié)果說明：(1)該選系F4具有較高的遺傳變異；(2)本實(shí)驗(yàn)是人工解剖受精，在此情況下精子與卵子混合均勻但是有效親本數(shù)量沒有達(dá)到100％，推其原因可能為某些親本間近交導(dǎo)致后代存活率降低。
　　利用本實(shí)驗(yàn)室自主開發(fā)的50個(gè)馬氏珠母貝EST-SSR標(biāo)記，

6、對(duì)馬氏珠母貝F4代快速生長(zhǎng)選育群體的90個(gè)個(gè)體基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS對(duì)50個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記與馬氏珠母貝總重、殼長(zhǎng)、殼高、殼寬和韌帶長(zhǎng)相關(guān)性進(jìn)行了方差分析。結(jié)果顯示，共有18個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記與馬氏珠母貝的5個(gè)生長(zhǎng)性狀相關(guān)，其它32個(gè)標(biāo)記對(duì)性狀的影響未達(dá)到顯著水平。研究發(fā)現(xiàn)9個(gè)標(biāo)記與總重顯著相關(guān)(p<0.05)；12個(gè)標(biāo)記與殼長(zhǎng)顯著相關(guān)，其中3個(gè)是極顯著相關(guān)；14個(gè)位點(diǎn)與殼高顯著相關(guān)，其中3個(gè)為極顯著相關(guān)；6個(gè)位點(diǎn)和殼