偽狂犬活疫苗(Bartha-K61株)生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵技術(shù)改進研究.pdf

1、偽狂犬病(Pseudorabies)又稱Auj eszky氏病，是一種由偽狂犬病毒引起的多種家畜和野生動物的急性傳染病。本病廣泛分布于世界各地，在我國該病也廣泛存在，尤其豬的偽狂犬病，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。因此偽狂犬病的預(yù)防不僅有利于我國養(yǎng)豬業(yè)規(guī)?；l(fā)展，而且對于相關(guān)疫病防控、疫苗研發(fā)與生產(chǎn)具有很好的指導(dǎo)意義。
　　 本研究主要針對偽狂犬活疫苗（Bartha-K61株）生產(chǎn)工藝改進中的關(guān)鍵技術(shù)進行改進，在遵循《偽狂犬

2、病活疫苗生產(chǎn)與檢驗規(guī)程》的前提下，用偽狂犬病毒Bartha-K61株制備病毒液，通過對一系列影響病毒效價的關(guān)鍵技術(shù)進行工藝優(yōu)化，最終科學(xué)制定生產(chǎn)流程，確立最優(yōu)的病毒增殖培養(yǎng)條件、最佳的收獲時間、最適的保存條件及時間，達到提高病毒液的效價、增加病毒液的收率及利用率、降低生產(chǎn)成本、提高經(jīng)濟效益的目的。
　　 不同接種方式對病毒效價的影響：用同步接種與傳統(tǒng)接毒方式（單層細胞接種）分別接毒，結(jié)果表明偽狂犬病毒（Bartha-K61株）采

3、取同步接種與單層細胞接種收獲的病毒效價沒有顯著差異，在安全檢驗、效力檢驗，結(jié)果表明試驗批疫苗完全可達到該疫苗的標(biāo)準(zhǔn)要求，有很好的安全性、對動物有較高的保護力。另外，采取同步接種方式更節(jié)約原輔材料的使用，可降低生產(chǎn)成本，縮短生產(chǎn)周期。
　　 不同梯度的接種量對病毒效價的影響：用12％、10％、8％三種接種量梯度接種細胞，結(jié)果表明三種梯度接種量增殖病毒的方法收獲的病毒效價沒有顯著差異；8％接種量試驗組制備疫苗進行安全檢驗、效力檢驗均

4、完全符合疫苗的標(biāo)準(zhǔn)要求，有很好的安全性、對動物有較高的保護力。不僅如此，降低種毒的使用量在生產(chǎn)中大大降低生產(chǎn)成本。因此，選擇8％的接種量作為生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)較優(yōu)。
　　 不同體積培養(yǎng)液對病毒效價的影響：用同步接種方式接種偽狂犬病毒Bartha-K61株，各試驗組加入培養(yǎng)液體積分別為1200ml/瓶、1500ml/瓶、2000ml/瓶，結(jié)果表明不同培養(yǎng)液體積的改變對病毒液效價的影響沒有顯著差異，相關(guān)成品的安全檢驗、效力檢驗可達到該疫苗

5、的標(biāo)準(zhǔn)要求。但是從穩(wěn)定生產(chǎn)、質(zhì)量均衡的角度看，每瓶加入1500ml最符合生產(chǎn)需求，因此選擇1500ml培養(yǎng)體積最終培養(yǎng)體積。
　　 不同培養(yǎng)收獲時間對病毒效價的影響：單層雞胚成纖維細胞接毒后，分別選取培養(yǎng)48h、60h、72h進行凍融、收獲，結(jié)果表明病毒增殖培養(yǎng)時間為72h的病毒效價顯著低于培養(yǎng)時間為48h和60小時。但是從生產(chǎn)實踐來看，便于規(guī)?；笊a(chǎn)，選擇病毒培養(yǎng)時間為48h進行凍融收獲便于操作，也可縮短生產(chǎn)周期。