雞新城疫活疫苗(La Sota株)濃縮法純化抗原生產(chǎn)工藝的建立.pdf

1、雞新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起禽類的一種重要的急性敗血性傳染病，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重影響，屬于家禽重大疫病之一。
　　疫苗的免疫接種能有效預(yù)防和控制雞新城疫的發(fā)生與流行，減少雞群因疫病感染造成的損失。常用于免疫接種的雞新城疫疫苗有活疫苗和滅活疫苗兩大類，活疫苗包括Ⅰ系，Ⅱ系（B1株）、Ⅲ系（F系）、Ⅳ系（La Sota株）和克隆-30等，其中新城疫Ⅳ系活疫苗（La Sota株）是我國(guó)最常用的優(yōu)良低毒力疫苗，長(zhǎng)期的應(yīng)

2、用效果表明La Sota株的免疫效果良好，能夠保護(hù)雞免受NDV的感染。在雞新城疫活疫苗生產(chǎn)過程中，傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝是將毒種接種SPF雞胚，收取尿囊液，按照一定比例進(jìn)行混合配苗，然后利用凍干技術(shù)制成疫苗。這種疫苗在臨床使用過程中，可能出現(xiàn)腫頭、停食、停水、局部炎癥、休克甚至死亡的不良反應(yīng)，同時(shí)也會(huì)造成生產(chǎn)性能降低，免疫功能下降，易于發(fā)病，對(duì)其它疫苗應(yīng)答下降。雞只免疫接種產(chǎn)生不良反應(yīng)是由多種因素造成，這些因素包括內(nèi)毒素、外毒素、熱源、異體蛋白

3、、蛋源、血清、革蘭陰性菌和環(huán)境。其中，內(nèi)毒素是導(dǎo)致疫苗接種雞只出現(xiàn)免疫不良反應(yīng)的主要因素之一。因此，在雞新城疫活疫苗（La Sota株）生產(chǎn)過程中，可以通過優(yōu)化雞新城疫活疫苗（La Sota株）中間產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，減少和避免疫苗內(nèi)毒素污染，達(dá)到提升疫苗的品質(zhì)，提高疫苗的安全性和有效性的目的。
　　本研究是在當(dāng)前雞新城疫活疫苗（La Sota株）成熟的生產(chǎn)工藝基礎(chǔ)上，根據(jù)新城疫病毒特點(diǎn)來開展試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)A、B、C和D共四組，其中A、

4、B和C組采用濃縮純化生產(chǎn)工藝連續(xù)進(jìn)行三批次生產(chǎn)，D組仍采用目前抗原直接配苗進(jìn)行生產(chǎn)，作為對(duì)照組。抗原生產(chǎn)按一定比例作適當(dāng)稀釋毒種，接種SPF雞胚尿囊腔0.1mL/胚，接種后密封針孔，置36.5℃繼續(xù)孵化，棄去72h內(nèi)死亡的雞胚，收獲96h的雞胚液，測(cè)定其血凝價(jià)及 EID50，檢驗(yàn)合格后一部分抗原利用頗爾超濾濃縮系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，濃縮后留取樣品備測(cè)血凝價(jià)及毒價(jià)，分別標(biāo)識(shí)為試驗(yàn)A組、B組和C組。另一部分抗原直接按規(guī)程規(guī)定的效價(jià)進(jìn)行配苗，標(biāo)識(shí)為對(duì)

5、照D組；按規(guī)程規(guī)定的效價(jià)進(jìn)行配苗，連續(xù)進(jìn)行三批次生產(chǎn)，對(duì)四組產(chǎn)品進(jìn)行生產(chǎn)和常規(guī)檢測(cè)，包括內(nèi)毒素檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)、病毒含量測(cè)定、安全檢驗(yàn)和免疫攻毒試驗(yàn)，通過比較來建立雞新城疫活疫苗濃縮純化生產(chǎn)工藝。
　　結(jié)果表明：試驗(yàn)A組、B組和C組雞新城疫活疫苗（La Sota株）10/10安全檢測(cè)合格，內(nèi)毒素含量不超過20EU/mL，病毒含量大于106.0 EID50，且批次間差異不超過0.1個(gè)滴度；對(duì)照D組雞新城疫活疫苗（La Sota株）7/

6、10安全檢測(cè)合格，內(nèi)毒素含量超過50 EU/mL，病毒含量大于106.0 EID50。通過檢測(cè)結(jié)果比較，表明雞新城疫活疫苗（La Sota株）濃縮純化生產(chǎn)工藝建立的必要性，控制原輔料質(zhì)量，此濃縮純化生產(chǎn)工藝，不但能有效富集并調(diào)控病毒液含量，增加疫苗單位有效成分，降低疫苗使用量，而且同時(shí)能除去部分生物源性雜質(zhì)成分，減少中間產(chǎn)品病毒液內(nèi)毒素污染，減少批次間的差異，有效降低免疫接種不良反應(yīng)，從而提升產(chǎn)品質(zhì)量水平。本次試驗(yàn)確立了雞新城疫活疫苗（