蘇云金芽胞桿菌YBT1520殺蟲晶體突變株的蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)是目前世界上使用最廣泛的生物殺蟲劑之一,為革蘭氏陽性細(xì)菌,目前已分離到83個亞種,71個血清型。其高效殺蟲活性源于殺蟲晶體蛋白,該蛋白在穩(wěn)定期大量表達(dá)、積累并裝配成晶體。晶體代謝調(diào)控機(jī)制是目前研究蘇云金芽胞桿菌研究的熱點之一,因為到目前芽胞形成機(jī)制的研究已有了突破性的進(jìn)展,但是目前關(guān)于晶體代謝調(diào)控的機(jī)制仍然沒有一個合理并清晰的解釋。本文從高毒菌株YBT1520出發(fā),采用不同的

2、誘變方法得到其晶體的突變株,然后采用2-DE的方法,通過質(zhì)譜鑒定出蛋白差異的點。希望得到與晶體代謝調(diào)控相關(guān)的功能基因。
　　 1.利用寬氮離子束、紫外線+氯化鋰復(fù)合誘變、微波+紫外線復(fù)合誘變、NTG+氯化鋰復(fù)合誘變等誘變方法處理蘇云金芽胞桿菌YBT1520,篩選得到了三種類型的突變株:晶體變大、晶體變小、無晶體的突變株。
　　 2.進(jìn)行了穩(wěn)定性傳代實驗,晶體變小和無晶體的突變株20代傳代穩(wěn)定；抽取YBT1520及突變株的

3、質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)晶體變小的突變株與野生株相比少了pBMB12這個質(zhì)粒,而無晶體突變株的質(zhì)粒圖譜與野生株有較大的差異；測定了它們的生長曲線,晶體變小的突變株的生長趨勢基本和野生株一致,但是無晶體突變株在進(jìn)入穩(wěn)定期后生長波動范圍較大；測定了野生株和突變株的殺蟲活性,結(jié)果顯示晶體變小的突變株的殺蟲活性與野生株相似,而無晶體突變株基本沒有殺蟲活性。根據(jù)突變株的信息以及實驗?zāi)康?確定以晶體變小的突變株為雙向電泳的材料。
　　 3.YBT1520