池蝶蚌性腺相關(guān)蛋白及其理化性質(zhì)研究.pdf

1、關(guān)于雙殼類軟體動(dòng)物生殖生物學(xué)的研究,國(guó)內(nèi)外已有一些報(bào)道。目前,對(duì)于性別、生殖的分子研究主要集中在人類和模式生物中,有關(guān)于水生生物這方面的研究很少,并且有關(guān)池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)性腺發(fā)育與相關(guān)蛋白生物學(xué)的內(nèi)容還未見報(bào)道。作為淡水珍珠育珠的代表,池蝶蚌具有巨大經(jīng)濟(jì)價(jià)值,研究其性腺發(fā)育與相關(guān)蛋白等內(nèi)容可為池蝶蚌種質(zhì)資源保護(hù)、優(yōu)良品種培育、人工繁育等提供理論參考和依據(jù)。
　　 本文以池蝶蚌為研究對(duì)象,利用石蠟切

2、片、SDS-PAGE、Native-PAGE、排阻凝膠層析、蛋白透析等現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)對(duì)性腺變化形態(tài)學(xué)、性腺總蛋白種類、雌雄性腺相關(guān)蛋白動(dòng)態(tài)變化、雄性性腺相關(guān)蛋白的純化及其部分性質(zhì)進(jìn)行了研究,為進(jìn)一步開展池蝶蚌生殖生物學(xué)研究提供依據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　 一、池蝶蚌性腺蛋白研究
　　 分別采取石蠟切片和SDS-PAGE電泳對(duì)5齡池蝶蚌性腺組織學(xué)變化和性腺總蛋白變化進(jìn)行觀察,分析性腺發(fā)育與蛋白動(dòng)態(tài)變化的聯(lián)系。池蝶蚌繁殖期和非

3、繁殖期性腺發(fā)生顯著變化,并且雌性個(gè)體性腺蛋白水平在不同發(fā)育階段呈現(xiàn)明顯變化。從非繁殖期向繁殖期的過渡中,雌性性腺相關(guān)蛋白的表達(dá)水平是逐步提高的,并在繁殖期達(dá)到最高峰,之后表達(dá)量減少并維持在一定水平；雄性性腺相關(guān)蛋白的表達(dá)水平也呈現(xiàn)周期變化,非繁殖期表達(dá)量最大,繁殖期表達(dá)量最小。
　　 二、池蝶蚌雄性性腺蛋白部分理化性質(zhì)研究
　　 采用蛋白透析法從成熟池蝶蚌雄性性腺中提取相關(guān)蛋白,并初步分析了其理化性質(zhì)。Native-PA

4、GE和SDS-PAGE結(jié)果顯示:其三條蛋白條帶的相對(duì)分子量為16.02KDa、14.96 KDa和13.41 KDa；樣品緩沖液中β-巰基乙醇的有無并不影響蛋白條帶,推測(cè)其三條蛋白條帶為三種不同蛋白。將純化后的樣品進(jìn)行Native-PAGE,電泳后的凝膠分別使用蘇丹黑B進(jìn)行脂蛋白特異性染色和羅丹明B進(jìn)行磷蛋白特異性染色,并采用考馬斯亮藍(lán)染色進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果顯示凝膠與這兩種試劑均出現(xiàn)陰性反應(yīng),從而說明該三種蛋白不是一種富含脂、磷的大分子蛋白