揚(yáng)州地區(qū)部分屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和動(dòng)物醫(yī)院豬源沙門菌分離鑒定、耐藥性分析及致病性研究.pdf

1、沙門菌是一類極其重要的食源性病原菌，在嚴(yán)重威脅著畜禽產(chǎn)品的安全的同時(shí)，也給人類的健康造成了嚴(yán)重的威脅。蛋類、畜禽類動(dòng)物產(chǎn)品現(xiàn)在已成為沙門菌的重要污染源，而豬肉是中國(guó)重要的肉類消費(fèi)品，在中國(guó)人日常飲食的動(dòng)物蛋白來(lái)源中占到近70％的比例，因而有效的控制和減少豬肉在屠宰、加工、運(yùn)輸及銷售過(guò)程中細(xì)菌的污染對(duì)提升肉制品的衛(wèi)生情況和減少食品衛(wèi)生安全問(wèn)題的發(fā)生有著重要的意義。
　　本研究旨在調(diào)查揚(yáng)州地區(qū)部分屠宰場(chǎng)的屠宰流程及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中豬肉沙門菌

2、的污染情況及沙門菌分離株的耐藥情況，同時(shí)根據(jù)動(dòng)物醫(yī)院送檢病料中沙門菌的分離情況判斷揚(yáng)州周邊地區(qū)豬源沙門菌的血清型及流行情況，為流行病學(xué)調(diào)查提供數(shù)據(jù)資料，也為周邊豬場(chǎng)沙門菌病的防治提供資料。
　　1、揚(yáng)州地區(qū)部分屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)及動(dòng)物醫(yī)院樣品中沙門菌的分離鑒定及耐藥性分析
　　2015年至2016年間，共從揚(yáng)州某屠宰場(chǎng)采集樣品1358份、揚(yáng)州農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集樣品182份和揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院采集樣品187份，按照GB4789.4-20

3、10中分離程序?qū)Σ杉瘶悠愤M(jìn)行沙門菌分離，并結(jié)合PCR方法進(jìn)行沙門菌鑒定。屠宰場(chǎng)樣品中沙門菌的分離率為10.5％，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)樣品中沙門菌分離率19.7％，動(dòng)物醫(yī)院樣品中沙門菌的分離率為2.6％。結(jié)果分析說(shuō)明季節(jié)對(duì)屠宰場(chǎng)和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中沙門菌的分離率無(wú)明顯影響。對(duì)不同來(lái)源的沙門菌分離株進(jìn)行血清型鑒定，屠宰場(chǎng)分離株中德?tīng)柋吧抽T菌分離率最高(63.6％)。鼠傷寒沙門菌、羅森沙門菌也是常見(jiàn)的血清型;農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)分離株中羅森沙門菌和德?tīng)柋吧抽T菌分離率最高(2

4、7.8％)，鴨沙門菌次之;而動(dòng)物醫(yī)院送檢病料中的檢出的全部為鼠傷寒沙門菌(100％)。對(duì)所有分離株進(jìn)行藥物敏感性測(cè)定，結(jié)果表明84.8％沙門菌分離株對(duì)四環(huán)素表現(xiàn)出極高的耐藥率，對(duì)強(qiáng)力霉素、羧芐西林也有較高的耐藥率。屠宰場(chǎng)分離株中57.4％菌株耐9種以上抗生素，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中44.4％菌株對(duì)9種以上抗生素產(chǎn)生抗藥性，而動(dòng)物醫(yī)院分離株9種以上抗生素耐藥率則高達(dá)100.0％。
　　2、屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)及動(dòng)物醫(yī)院來(lái)源的沙門菌分離株的毒力基因測(cè)

5、定、PFGE分型分析及小鼠致病性研究
　　為研究沙門菌分離株中毒力基因的分布，運(yùn)用PCR方法對(duì)全部分離株進(jìn)行mogA，sscA，sseC, mgtC, siiE, sopB毒力基因的檢測(cè)，各毒力基因檢出率分別為81.5％(150/184)、70.1％(129/184)、68.5％(126/184)、87.5％(161/171)、85.7％(158/184)、70.7％(130/184)。共有57株沙門菌含有全部6種毒力基因，占全部

6、分離株31％，其中屠宰場(chǎng)來(lái)源的沙門菌有47株，占82.5％，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)來(lái)源的沙門菌有5株，占8.75％，動(dòng)物醫(yī)院來(lái)源的沙門菌有5株，占8.75％。通過(guò)脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)分型將27株德?tīng)柋吧抽T菌、9株羅森沙門菌及17株鼠傷寒沙門菌分成18、8和17個(gè)PFGE譜型(PFGEpatterns，PF)。從農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中可以找到與屠宰場(chǎng)來(lái)源沙門菌相同的PFEG譜型。表明沙門菌可在

7、屠宰場(chǎng)和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)之間傳播。
　　選取5個(gè)分離株和1株豬霍亂沙門菌參考株(CVCC503)以109CFU的劑量腹腔注射攻毒6-8周齡KM系小鼠，死亡高峰發(fā)生于攻毒后8-12 h，且攻毒后的24 h內(nèi)，各攻毒組小鼠全部死亡。剖解死亡小鼠可以觀察到小鼠組織臟器呈現(xiàn)急性敗血癥病變，且病死小鼠有嚴(yán)重的腹腔積液。LD50結(jié)果表明，6個(gè)攻毒組中JY-1攻毒組的LD50值為1.48×105，小鼠的死亡率為52.8％，6個(gè)菌株中JY-1菌株對(duì)小鼠的