OsSNAC1基因?qū)υ缇究沼?31的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、為了改良黑龍江水稻空育131的耐鹽堿特性,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將外源基因SNAC1和CIPK15遺傳轉(zhuǎn)化到水稻空育131中。有三種載體pCAMBIA1301s—SNAC1和p1301U-CIPK15,pC2003H-SNAC1,分別轉(zhuǎn)入到寒區(qū)優(yōu)良水稻品種空育131的核基因組中。各獲得一批遺傳轉(zhuǎn)化苗,并對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻苗進(jìn)行耐鹽堿鑒定和DNA水平的拷貝數(shù)分析,測(cè)定目的基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)水稻遺傳轉(zhuǎn)化載體pCA

2、MBIA1301s—SNAC1和pC2003H-SNAC1,p1301U-CIPK15進(jìn)行酶切和PCR檢測(cè)驗(yàn)證表明,載體和目的基因均準(zhǔn)確無(wú)誤。將攜帶目的基因SNAC1和CIPK15的質(zhì)粒pCAMBIA1301s—SNAC1和pC2003H—SNAC1,p1301U-CIPK15分別電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入農(nóng)桿菌,都獲得了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子EHA105(pCAMBIA1301s-SNAC1)和EHA105(pC2003H-SNAC1),EHA105(p130

3、1U—CIPK15)。
　　 2.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法,轉(zhuǎn)化水稻空育131,質(zhì)粒pCAMBIA1301s-SNAC1轉(zhuǎn)化后,獲得了來(lái)自36塊獨(dú)立抗性愈傷組織,成活42株；質(zhì)粒pC2003H-SNAC1轉(zhuǎn)化后獲得獨(dú)立抗性愈傷12塊,成活了5株；質(zhì)粒p1301U-CIPK15轉(zhuǎn)化后獲得獨(dú)立抗性愈傷15塊,成活了31株轉(zhuǎn)基因苗。
　　 3.對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻空育131 T1代進(jìn)行PCR分析,質(zhì)粒pCAMBIA1301s-SN

4、AC1的42株植株中陽(yáng)性株38陽(yáng)性率90.49％；質(zhì)粒pC2003H-SNAC1的5株植株中陽(yáng)性株3株,陽(yáng)性率60％,質(zhì)粒p1301U-CIPK15的31株植株中陽(yáng)性株28株,陽(yáng)性率90.3％。SNAC1和CIPK15基因已經(jīng)整合到黑龍江水稻空育131的核基因組中。
　　 4.對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻空育131 T1代做抗潮霉素篩選試驗(yàn),用100mmol·L-1NaHCO3進(jìn)行耐鹽堿的初步抗性檢測(cè),性狀調(diào)查等方面對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻分析,說(shuō)明轉(zhuǎn)基因