臍橙鈣調(diào)蛋白基因(CsCAB)的克隆、表達(dá)分析及轉(zhuǎn)化煙草的研究.pdf

1、奉節(jié)臍橙(Citurs sinensis L.Osbeck)是“華盛頓臍橙”品系的選優(yōu)株系。作為重慶市柑橘中的優(yōu)良品種，在內(nèi)外銷(xiāo)中具有著較強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。然而，奉節(jié)臍橙果皮容易發(fā)生褐變，對(duì)臍橙果皮褐變的誘發(fā)因素已有大量研究，但在分子機(jī)理研究方面尚十分缺乏。
　　 通過(guò)對(duì)在本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的臍橙果皮褐變相關(guān)基因的cDNA差減文庫(kù)分析。篩選了一個(gè)與鈣調(diào)蛋白基因同源的EST序列，通過(guò)快速擴(kuò)增cDNA末端（RACE）方法成功克隆得到全長(zhǎng)，

2、命名為CsCAB，GenBank登錄號(hào)EF010854。前期工作已經(jīng)證明CsCAB是褐變相關(guān)蛋白，但對(duì)于CsCAB蛋白在臍橙褐變過(guò)程中的調(diào)控模式以及功能并不清楚。
　　 本研究首先運(yùn)用半定量RT-PCR的方法分析了臍橙鈣調(diào)蛋白基因（CsCAB）在果皮褐變發(fā)生進(jìn)程和不同組織中的表達(dá)模式。結(jié)果表明，CsCAB基因在不同的植物組織中表達(dá)豐度不同，伴隨果皮褐變指數(shù)的上升，CsCAB基因的表達(dá)增強(qiáng)。同時(shí)，本研究分析了在機(jī)械損傷的脅迫條件下

3、CsCAB的表達(dá)情況，結(jié)果表明CsCAB及其下游靶基因ATPase和GAD受到機(jī)械損傷的誘導(dǎo)。由于鈣調(diào)蛋白本身并沒(méi)有功能，主要是通過(guò)傳遞信號(hào)給下游靶蛋白，從而調(diào)控著植物的生理過(guò)程。所以，果皮褐變的過(guò)程中，鈣調(diào)蛋白可能通過(guò)調(diào)控下游的一系列靶蛋白發(fā)揮著重要的作用。
　　 本研究以臍橙果皮為材料，提取RNA并進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，克隆了CsCAB基因全長(zhǎng)cDNA序列，并對(duì)其進(jìn)行序列分析。結(jié)果表明，CsCAB包含一個(gè)621bp的開(kāi)放閱讀