鴨源新城疫病毒分子流行病學(xué)及生物學(xué)特性研究.pdf

1、新城疫病毒(NDV)不同毒株毒力和致病性差異很大，對不同宿主的感染性也不同。長期以來，水禽一直被認(rèn)為是NDV的天然貯存庫，鵝、鴨等能攜帶病毒，但通常不表現(xiàn)任何臨床癥狀，甚至對NDV強毒株具有堅強的抵抗力。但是自1997年以來，我國華南和華東地區(qū)相繼報道發(fā)生了鵝源NDV，并有較高的發(fā)病率和死亡率，從而改變了NDV對水禽不具有致病性的觀點。與鵝相比，鴨發(fā)生致病性ND的數(shù)量較少，但從最近幾年的報道來看，鴨感染NDV并導(dǎo)致明顯致病性的病例呈現(xiàn)日

2、益增多的趨勢。2000年以來，安徽、山東、江蘇、福建、浙江、河北等地的鴨群發(fā)生ND的臨床病例越來越多，嚴(yán)重影響我國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。水禽ND的發(fā)生與流行說明隨著NDV宿主譜的不斷擴大和新基因型的不斷出現(xiàn)，NDV的毒力也在不斷的變化，同時尚不能確定水禽ND病原的來源，對此病的防制又增加了新的難度。
　　 鴨源致病性NDV的出現(xiàn)在病原學(xué)和流行病學(xué)有著重要的意義，本研究從全國不同地區(qū)分離到了18株鴨源NDV，并對從山東某種鴨場產(chǎn)蛋下降種鴨

3、中分離的NDV09-023株進行了生物學(xué)特性的詳細研究。
　　 1.從全國不同地區(qū)的活禽市場、屠宰場及養(yǎng)殖場采集病料和棉試子，通過接種雞胚、HA-HI試驗及RT-PCR方法對病原進行了分離鑒定，成功分離到18株鴨源NDV毒株。對分離株的F基因主要功能區(qū)核苷酸序列和由其推導(dǎo)的氨基酸序列進行了同源性比較和變異分析，推導(dǎo)了F蛋白裂解位點的氨基酸序列，并根據(jù)其cds的1～389nt和1～374nt序列構(gòu)建了系統(tǒng)進化樹，確定了分離株的基因

4、型。結(jié)果顯示:按照遺傳距離的遠近，18個分離株分成兩群，其中12個分離株和ClassⅠ NDV代表株有較近的遺傳距離，屬于ClassⅠ NDV中的基因3型，說明ClassⅠ NDV在我國的鴨群中已廣泛存在;6個分離株和ClassⅡ NDV有較近的遺傳距離，屬于ClassⅡ NDV，分屬于基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型三個不同的基因型。F蛋白裂解位點氨基酸序列顯示15個分離株為弱毒，3個分離株為強毒。本次分離到的毒株包含四個基因型，既有ClassⅠ N

5、DV，又有ClassⅡ NDV，既有強毒株，又有弱毒株，說明我國鴨源NDV的流行毒株、流行情況極為復(fù)雜。
　　 2.對NDV09-023株進行了一系列生物學(xué)特性測定，毒力測定發(fā)現(xiàn)MDT為49.6h，ICPI為1.725，均符合OIE規(guī)定的NDV強毒株標(biāo)準(zhǔn)，序列分析發(fā)現(xiàn)F基因推導(dǎo)的F蛋白裂解位點氨基酸序列與NDV強毒株的特征性結(jié)構(gòu)一致(112R-R-Q-K-R-F117)，遺傳進化分析表明在分類地位上屬于ClassⅡ NDV基因Ⅶ

6、型中的d亞型，生物學(xué)特性和F蛋白裂解位點氨基酸序列表明本分離株屬于NDV強毒株。將本分離株株和3株NDV經(jīng)典毒株滅活后加入弗氏佐劑制備滅活苗，分別免疫鴨和SPF雞，采血制備單因子陽性血清，將4株病毒分別與相應(yīng)的抗血清做交叉血凝抑制試驗(Cross-HI)，通過抗原比值來判斷本分離株與NDV經(jīng)典毒株之間的抗原差異，經(jīng)測定，本分離株與La Sota株、寧夏株、F48E8株的抗原比值分別為0.904、0.856、0.932，說明它們之間存在相