禾谷鐮刀菌中retromer復(fù)合體的功能初探.pdf

1、禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)是一種絲狀子囊菌,主要侵染谷類作物,是引起小麥赤霉病的主要病原菌。侵染作物后能在谷粒上產(chǎn)生真菌毒素(如:DON毒素),造成經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量的損失,嚴(yán)重威脅人畜健康。為生產(chǎn)上防治赤霉病提供新思路,對(duì)禾谷鐮刀菌侵染循環(huán)中的各個(gè)過程及其與寄主互作的分子調(diào)控機(jī)制的研究是十分必要的。Retromer是一個(gè)由膜泡分揀蛋白(Vps)結(jié)合而成的五聚體蛋白復(fù)合體,不同物種間各亞基的同源蛋白十分保守,它介導(dǎo)跨膜

2、蛋白從內(nèi)涵體逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體網(wǎng)絡(luò)中。本研究依據(jù)比較生物學(xué)方法,在禾谷鐮刀菌基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行同源序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)禾谷鐮刀菌中FG02756、FG01155、FG01552、FG09600和FG02011蛋白分別與釀酒酵母中retromer復(fù)合體的五個(gè)亞基Vps35、Vps26、Vps29、Vps17和Vps5蛋白同源,而FG00615蛋白則與retromer復(fù)合體的結(jié)合受體蛋白Vps10同源。利用同源重組的方法分別得到這六個(gè)基因的敲除突變

3、體菌株。表型分析發(fā)現(xiàn)retromer復(fù)合體五個(gè)亞基的缺失突變體菌株與野生型菌株P(guān)H-1相比,均表現(xiàn)出:菌落生長速度減慢,邊緣呈現(xiàn)不規(guī)則狀,氣生菌絲嚴(yán)重減少,產(chǎn)孢量明顯下降,分生孢子畸形,有性生殖能力減弱,且對(duì)小麥的致病性喪失；而FG00615基因的缺失突變體菌株與野生型菌株P(guān)H-1相比則無明顯差異。分別構(gòu)建了FG02756-GFP和FG01155-RFP基因融合互補(bǔ)載體,經(jīng)PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化至相應(yīng)基因的缺失突變體中,缺失突變體菌株的各種缺陷