空間搭載紫花苜蓿種子第一代植株表型變異及基因多態(tài)性分析.pdf

1、本研究以經(jīng)過(guò)“神舟三號(hào)”衛(wèi)星搭載的紫花苜蓿種子第一代植株為材料，利用SSR（簡(jiǎn)單重復(fù)序列）分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)供試紫花苜蓿的基因多態(tài)性進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.紫花苜蓿SSR-PCR反應(yīng)體系的建立：根據(jù)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)了探索正交試驗(yàn)和細(xì)調(diào)正交試驗(yàn)來(lái)確定紫花苜蓿SSR-PCR反應(yīng)體系中各成分的濃度，從dNTP、Taq酶、Primers、Mg2+4種因素對(duì)紫花苜蓿SSR-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，得到適合紫花苜蓿的S

2、SR-PCR最佳反應(yīng)體系，即25μl的反應(yīng)體系中含有dNTP0.2 mmol/L、TaqDNA聚合酶2U、引物0.7μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、以及2.5μl10xbuffer和60ng模板DNA。循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性3min，95℃變性1min，52℃退火1.5min，72℃延伸60s，共循環(huán)35次，最后72℃保溫8min，4℃保存。
　　 2.SSR引物的篩選與PCR擴(kuò)增：從17對(duì)SSR引物中篩選出6對(duì)擴(kuò)

3、增產(chǎn)物具有穩(wěn)定多態(tài)性的引物。對(duì)材料進(jìn)行檢測(cè)，共檢測(cè)到25個(gè)等位基因，每對(duì)引物檢測(cè)出2～8個(gè)等位基因，平均為4.17個(gè)。結(jié)合4個(gè)突變指標(biāo)，檢測(cè)經(jīng)過(guò)篩選的植株的等位基因頻率及每個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性信息量（PIC），PIC變化于0.2216～0.8328之間，平均為0.6366，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以說(shuō)明航天搭載可導(dǎo)致被搭載的多個(gè)紫花苜蓿種子基因組產(chǎn)生變異，有些甚至出現(xiàn)多個(gè)等位基因變異。
　　 3.經(jīng)過(guò)基因多樣性檢測(cè)初步篩選出突變單株：在224個(gè)

4、SP1植株中，56株（總株數(shù)的25％）的基因組DNA可擴(kuò)增出與地面對(duì)照不同的差異帶，其中有13株具3個(gè)以上多態(tài)性等位基因，占總株數(shù)的5.81％。這13株分別是：DEFI-04、DEFI-07、DEFI-50、DERBY-15、DERBY-35、Algonguin-01、Algonguin-10、Algonguin-28、Algonguin-35、Algonguin-43、Algonguin-65、Sanditi-21、Sanditi-4