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1、從水稻葉片上分離得到兩株生防細(xì)菌,將其分別命名為:Af1、Af4。本實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容主要包括:1.通過(guò)培養(yǎng)特征、形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征以及16SrRNA序列同源性分析對(duì)拮抗菌Af1、Af4進(jìn)行鑒定。2.通過(guò)對(duì)稻瘟病菌絲生長(zhǎng)的抑制實(shí)驗(yàn)、對(duì)孢子萌發(fā)的抑制實(shí)驗(yàn)、廣譜抑菌實(shí)驗(yàn)以及不同培養(yǎng)時(shí)間、不同濃度、不同pH值的發(fā)酵液對(duì)稻瘟病菌的拮抗性測(cè)定等實(shí)驗(yàn)對(duì)Af1、Af4進(jìn)行抑菌活性鑒定。3.按照蛋白和脂肽類(lèi)抗生素分離純化方法定向地對(duì)Af1、Af4發(fā)酵液
2、活性物質(zhì)進(jìn)行提取,獲得粗提物質(zhì),并對(duì)粗提物質(zhì)的生化特性進(jìn)行研究,最后對(duì)脂肽類(lèi)抗生素合成相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè)。4.水稻葉片離體接種實(shí)驗(yàn),對(duì)Af1、Af4進(jìn)行生物防效測(cè)定。
結(jié)果表明:1.通過(guò)鑒定表明Af1、Af4兩個(gè)生防菌株同為枯草芽孢桿菌,兩者的理化特征大致相似,但是Af1能夠產(chǎn)生色素,而Af4不能夠產(chǎn)生色素。2.Af1對(duì)稻瘟病菌的抑菌半徑達(dá)到22mm,Af4對(duì)稻瘟病菌的抑菌半徑達(dá)到23mm:Af1和Af4均能抑制稻瘟病孢子的
3、萌發(fā),當(dāng)發(fā)酵液濃度為1:1(50%)時(shí),抑制率最高分別可達(dá)到88%和92%,當(dāng)濃度降低到1:124(0.8%)時(shí),抑制率則為16.4%和46%;Af1、Af4具有廣譜抑菌作用,除Af1對(duì)水稻紋枯病無(wú)作用外,Af1、Af4對(duì)稻瘟病菌、稻曲病菌等十種供試病原菌均具有抑制作用;Af1、Af4的發(fā)酵液在不同濃度梯度檢測(cè),均具有抑菌活性;Af1在發(fā)酵液培養(yǎng)5d時(shí)抑菌活性最高,而Af4在3d-4d抑菌活性最高,且兩者都耐高溫;兩者均不能耐酸性環(huán)境,
4、適宜在中偏堿性的環(huán)境下生存,Af1在發(fā)酵液pH8時(shí),抑菌活性最高,Af4在pH7時(shí)有較高抑菌活性。3.Af1產(chǎn)生多種類(lèi)型的抗真菌物質(zhì),其中包括蛋白質(zhì)和抗生素,抗生素粗提物對(duì)溫度、蛋白酶K不敏感,而蛋白質(zhì)粗提物對(duì)蛋白酶K敏感,對(duì)溫度不敏感,并能夠抑制稻瘟病菌黑色素的形成;Af4發(fā)酵液粗提物與脂肽類(lèi)抗生素一致,對(duì)溫度、對(duì)蛋白酶K不敏感;從Af1中檢測(cè)到fenB、sfp、ituA三個(gè)脂肽抗生素合成相關(guān)基因,而從Af4中檢測(cè)到mycB、fenB
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