基于β-葡萄糖苷酶活力和HPLC指紋圖譜的蜂膠質(zhì)量控制研究.pdf

1、蜂膠是蜜蜂從植物幼芽、樹皮與樹干裂縫上采集樹脂，并混入其上顎腺分泌物和蜂蠟加工而成的具芳香氣味的膠狀固體物。由于蜂膠植物來源廣泛，化學(xué)成分復(fù)雜，使其具有多種藥理活性，同時(shí)也給蜂膠的質(zhì)量控制帶來很大麻煩。
　　 蜂膠具有廣泛的藥理活性，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品、飲料行業(yè)及醫(yī)療中。有研究表明，隨著儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)，蜂膠內(nèi)的總黃酮和多酚含量明顯下降，藥理活性降低。目前，蜂膠質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)只強(qiáng)調(diào)總黃酮含量的高低，對(duì)于從蜜蜂采集樹脂到制成各種蜂膠制劑

2、銷售，蜂膠的化學(xué)組成是否發(fā)現(xiàn)變化尚沒有研究，對(duì)蜂膠原料新鮮程度更沒有相關(guān)的規(guī)定。
　　 在溫帶地區(qū)，蜂膠的植物來源主要以楊屬及其雜交屬的芽苞分泌物為主。在這些地區(qū)采集的蜂膠的化學(xué)成分與楊樹芽的成分極其相似。由于蜂膠生產(chǎn)受植物來源、季節(jié)、氣候條件以及生產(chǎn)過程中多種因素影響，產(chǎn)量相對(duì)有限。蜂膠原料的供不應(yīng)求使得市場(chǎng)上出現(xiàn)了在蜂膠中摻入楊樹膠(楊樹芽提取物)或直接以楊樹膠冒充蜂膠的現(xiàn)象。楊樹膠在顏色、氣味、形狀上都與蜂膠十分相似，而我

3、國(guó)現(xiàn)有的蜂膠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無法區(qū)分蜂膠與楊樹膠。
　　 蜂膠中所含化學(xué)成分有三個(gè)來源：蜜蜂采集回來的植物分泌物，蜜蜂代謝的分泌物以及在蜂膠采集加工過程中加入的物質(zhì)。為了解決上述問題，我們從蜂膠是動(dòng)植物雙源產(chǎn)品入手，一方面研究蜜蜂在采集蜂膠過程中加入的腺體分泌物以及這些分泌物在蜜蜂將樹脂轉(zhuǎn)化為蜂膠過程中所起的作用，首次在蜂膠中檢測(cè)到了β-葡萄糖苷酶活力，并探索了該酶與蜂膠新鮮度的關(guān)系；另一方面，構(gòu)建了區(qū)分蜂膠與楊樹膠的HPLC指紋圖譜，

4、首次確定了水楊苷作為蜂膠真假鑒別的指標(biāo)。具體研究結(jié)果如下：
　　 1.優(yōu)化了蜂膠中β-葡萄糖苷酶提取和測(cè)定條件。新鮮蜂膠樣本中均檢測(cè)到β-葡萄糖苷酶活力，而隨機(jī)購(gòu)買的蜂膠樣本中未檢測(cè)到β-葡萄糖苷酶活力。將新鮮蜂膠于-20℃、4℃和室溫下分別儲(chǔ)存，結(jié)果表明：在-20℃、4℃下儲(chǔ)存高達(dá)3個(gè)月的新鮮蜂膠沒有明顯的β-葡萄糖苷酶活力損失；4℃下儲(chǔ)存的新鮮蜂膠β-葡萄糖苷酶活力呈線性緩慢下降；室溫下儲(chǔ)存的新鮮蜂膠酶活力呈現(xiàn)指數(shù)迅速下降。

5、因此，提出蜂膠中β-葡萄糖苷酶活力高低可能是蜂膠新鮮度的指標(biāo)。
　　 蜂膠中的β-葡萄糖苷酶能夠水解p-硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷和p-硝基苯酚-β-D-半乳糖苷，但不能水解p-硝基苯酚-β-D-葡萄糖醛酸、p-硝基苯酚-β-D-纖維二糖苷、苦杏仁苷、纖維二糖和龍膽二糖。說明蜂膠中β-葡萄糖苷酶只能水解芳香基-β-單糖苷，不能水解芳香基β-二糖苷以及β-二糖。
　　 2.采用高效液相色譜法(HPLC)研究蜂膠中β-葡萄糖

6、苷酶對(duì)類黃酮單糖苷及二糖苷的水解作用，探討苷元結(jié)構(gòu)和糖基的連接部位對(duì)酶水解作用的影響。結(jié)果表明：蜂膠中β-葡萄糖苷酶粗酶提取液可以水解槲皮素3-O-葡萄糖苷、槲皮素7-O-葡萄糖苷、芹菜素7-O-葡萄糖苷、木樨草素7-O-葡萄糖苷，而不能水解蘆丁和柚配基7-O-葡萄糖鼠李糖苷。β-葡萄糖苷酶粗酶對(duì)類黃酮單糖苷的水解速度取決于類黃酮苷元的結(jié)構(gòu)和糖基的連接部位。
　　 3.采用HPLC指紋圖譜研究蜂膠與楊樹膠的差異，建立了區(qū)分蜂膠與

7、楊樹膠的指紋圖譜方法。該方法以蜂膠和楊樹膠水溶性物質(zhì)為研究對(duì)象，不同來源蜂膠指紋圖譜極其相似，但與楊樹膠的圖譜有十分明顯的差異。不同地區(qū)蜂膠樣本中有2個(gè)共有峰是楊樹膠中不具有的特征指紋峰，而不同來源楊樹膠中有3個(gè)共有峰是蜂膠中不具有的特征指紋峰，而且這5個(gè)特征峰明顯，相互間沒有干擾，易鑒別，可用于鑒定蜂膠與楊樹膠，以及蜂膠中是否摻有楊樹膠。
　　 4.首次建立了以水楊苷為指標(biāo)的蜂膠與楊樹膠HPLC指紋圖譜。采用該方法，所有蜂膠樣