海產(chǎn)貝類派琴蟲免疫熒光檢測技術研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、派琴蟲（也稱為帕金蟲，英文名稱Perkinsus）是影響世界海產(chǎn)貝類養(yǎng)殖和發(fā)展的主要病原之一，在世界各地廣泛流行。其精典的檢測方法為巰基醋酸鹽培養(yǎng)基(FTM)培養(yǎng)，但該方法相對耗時，培養(yǎng)方法也比較復雜，仍需要其它輔助方法方可確定為陽性蟲體。為了滿足對派琴蟲快速、準確的檢測需求，本研究制備了派琴蟲特異性抗原及其相應的特異性單克隆抗體，并在此基礎上建立了派琴蟲免疫熒光檢測方法。
　　根據(jù)GenBank公布的派琴蟲CB5D4細胞壁蛋白基

2、因序列設計并合成引物，成功擴增出派琴蟲CB5D4基因，并運用分子克隆方法構建了派琴蟲CB5D4-pMD19Tsimple質(zhì)粒，將CB5D4基因與原核表達載體pET32a連接后，轉(zhuǎn)入BL21(DE3)感受態(tài)細胞中獲得表達菌種，經(jīng)IPTG誘導并表達后，通過SDS-PAGE檢測，結果表明，該基因編碼的蛋白以可溶形式表達。將該蛋白純化后免疫小鼠，運用單克隆抗體技術進行細胞融合、亞克隆、克隆、建株后，共篩選出6株抗派琴蟲細胞壁蛋白的單克隆抗體細胞

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