黃柏生物堿及其復方對豬和小鼠熱應激中IL-4-IFN-γ的調(diào)控機制.pdf

1、近年來，很多證據(jù)表明Th1和Th2細胞在介導機體免疫應答中具有重要作用。Th1/Th2通過分泌的細胞因子進行自我和相互調(diào)節(jié)，維持二者的免疫平衡，這一特性與中醫(yī)理論的陰陽學說極為相似。Th1/Th2的平衡作為免疫平衡的核心，對免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定起著重要調(diào)節(jié)作用。Th1分泌的LFN-γ與Th2分泌的IL-4之間的平衡對Th1/Th2起關鍵調(diào)控作用。在實際研究中，一般以高表達的IFN-γ和IL-4分別代表Th1和Th2。 在獸醫(yī)臨床中發(fā)現(xiàn)

2、，由黃柏、蒼術、藿香、石膏以不同比例組成的中藥復方Ⅰ和中藥復方Ⅱ，可提高豬對高熱環(huán)境的適應能力。為探討黃柏生物堿及其復方對熱應激的調(diào)控機制，本文研究了高溫應激條件下豬和小鼠免疫相關指標lFN-γ、IL-4的變化規(guī)律以及黃柏生物堿及其復方的免疫調(diào)節(jié)作用。完成的實驗有： 采用ELISA法，研究中藥復方對熱應激后豬血清、脾臟中IFN-γ、IL-4水平的調(diào)控作用。熱應激可使IFN-γ、IL-4水平顯著上升，中藥復方Ⅰ和中藥復方Ⅱ均可顯著

3、調(diào)節(jié)熱應激時IFN-γlL-4水平的升高，使其恢復到正常，且中藥復方Ⅱ的效果更好。進一步研究中約復方Ⅱ顯示，中藥復方Ⅱ可有效調(diào)節(jié)熱應激所致的小鼠脾臟中IFN-γIL-4的改變，使其恢復至正常。 為評價復方中黃柏活性部位的藥理作用，建立了小鼠脾臟淋巴細胞體外增殖的熱應激模型。熱應激模型條件為：熱應激溫度40℃、熱應激時間1h、熱應激后3h采樣測定。 對黃柏生物堿的提取和純化進行了優(yōu)選。采用比色法篩選堿提、醇提、酸提、酸醇提

4、四種黃柏提取方法，醇提法的效果最好；采用正交設計法優(yōu)化黃柏醇提法的提取工藝，提取工藝為：生藥10倍量的75％乙醇回流提取3次，每次1.5h；采用大孔樹脂吸附法和鹽析法篩選黃柏純化工藝，前者效果較好且以30％的乙醇作為洗脫劑，所得生物堿的含量最高。 采用MTT法，篩選黃柏生物堿的活性部位，高溫可顯著抑制小鼠脾臟淋巴細胞的增殖。堿提、醇提、酸醇提、酸提黃柏生物堿(100μg/ML)均可顯著促進小鼠脾臟淋巴細胞增殖。用大孔吸附樹脂純化

5、醇提的黃柏生物堿進行藥效學篩選，結果顯示100μg/mL的黃柏生物堿對小鼠脾臟淋巴細胞體外增殖的促進作用最強。為進一步驗證MTT法篩選出的黃柏生物堿活性部位對熱應激的免疫調(diào)控作用，采用ELISA法測定了體外培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細胞IFN-γ、IL-4的含量，小鼠脾臟淋巴細胞在熱應激條件下IFN-γ、IL-4水平偏離正常，純化黃柏生物堿可使其迅速恢復止常。 以上試驗表明，黃柏生物堿及其中藥復方均可顯著調(diào)節(jié)熱應激對機體免疫機能所致的改變