Zfy基因干擾對(duì)小鼠性別控制的研究.pdf

1、睪丸是雄性最重要的生殖腺，它是雄性激素分泌及精子發(fā)生的場(chǎng)所。Zfy基因位于Y染色體的短臂上，與精子的形成與發(fā)生相關(guān)，作為一個(gè)較強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄激活因子，引導(dǎo)靶基因穿過(guò)核膜，定位于精子細(xì)胞核內(nèi)，可能對(duì)精子變態(tài)過(guò)程中的某些基因具有轉(zhuǎn)錄激活作用。本研究根據(jù)Zfy基因特點(diǎn)，設(shè)計(jì)shRNA片段，進(jìn)行Zfy基因的RNAi實(shí)驗(yàn)，采用RT-PCR分析干擾后Zfy基因的mRNA表達(dá)水平，并統(tǒng)計(jì)經(jīng)干擾后子二代的性別比例。具體研究結(jié)果如下：
　　 1.根據(jù)G

2、en Bank提供的小鼠Zfy基因mRNA序列，針對(duì)該基因的編碼區(qū)，設(shè)計(jì)并合成了shRNA干擾片段。以Ambion公司pSilencer5.1-H1 Retro為載體，構(gòu)建小鼠靶向Zfy基因的shRNA表達(dá)載體pSilencer5.1/Zfy215及pSilencer5.1/Zfy2102，經(jīng)酶切和序列測(cè)定證實(shí)，實(shí)驗(yàn)所構(gòu)建的表達(dá)載體中含有設(shè)計(jì)合成的干擾序列，且插入序列的位置及方向均正確，上下游表達(dá)調(diào)控元件完整。說(shuō)明兩個(gè)shRNA表達(dá)載體

3、構(gòu)建成功，可以用于小鼠Zfy基因干擾實(shí)驗(yàn)。
　　 2.將構(gòu)建的兩個(gè)Zfy基因siRNA重組表達(dá)載體進(jìn)行小鼠體內(nèi)RNAi的研究。選取64只雄鼠隨機(jī)分成四組（每組16只），第一組、第二組為試驗(yàn)組，分別注射重組質(zhì)粒p215與p2102，第三組與第四組作為對(duì)照組，分別注射同等體積的空載體pSilencer5.1-H1 Retro及生理鹽水。間隔10天注射一次，連續(xù)注射4次。最后一次注射17d后，每組8只雄鼠按1:1與雌鼠交配，另外8只采

4、集睪丸組織，利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)Zfy基因mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果表明，pSilencer5.1/Zfy2102干擾后Zfy基因的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。繁殖試驗(yàn)表明后代雌鼠率達(dá)到72.3%，極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。pSilencer5.1/Zfy215干擾后，Zfy基因的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，后代雌鼠率與對(duì)照組無(wú)顯著差異。
　　 本文通過(guò)沉默生精過(guò)程中Z