利用轉(zhuǎn)基因和VIGS技術(shù)初步研究MgSM1、OsBIMK2和OsBIRH1在水稻中的功能.pdf

1、在植物和病原物長期的斗爭過程中，植物形成了一系列復(fù)雜的防御措施抵御病原物的侵襲。其中，植物能利用一些病原物激發(fā)子增強(qiáng)自身抗性。與此同時(shí)，植物中也存在一些基因直接地或間接地參與抗病防衛(wèi)反應(yīng)的調(diào)控。
　　MgSM1基因來源于稻瘟病菌，編碼的MgSM1蛋白具有免疫誘導(dǎo)活性，能增強(qiáng)植株的抗病性。本研究將MgSM1基因克隆進(jìn)含有玉蜀黍泛素啟動(dòng)子的載體pCoU，構(gòu)建MgSM1的過量表達(dá)載體。通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumef

2、aciens)介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻，經(jīng)Hyg+/Cef+抗性篩選和PCR驗(yàn)證獲得15株過量表達(dá)MgSM1 T0代轉(zhuǎn)基因水稻植株。
　　OsBIMK2基因編碼絲裂原活化蛋白激酶，在植物細(xì)胞信號傳導(dǎo)中起著重要作用。本研究利用VIGS技術(shù)，將OsBIMK2基因沉默，離體接種稻瘟病菌和剪葉接種稻白葉枯病菌后，發(fā)現(xiàn)經(jīng)沉默處理后的葉片比未經(jīng)處理的葉片的病斑大，病情指數(shù)高，由此可以初步判斷OsBIMK2具有增強(qiáng)抗病性的功能。進(jìn)而，將OsBIMK2的過

3、量表達(dá)基因片段和沉默小片段分別克隆進(jìn)含有玉蜀黍泛素啟動(dòng)子的載體pCoU，構(gòu)建了OsBIMK2基因的過量表達(dá)載體和沉默載體。通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化入水稻，經(jīng)Hyg+/Cef+抗性篩選和PCR驗(yàn)證獲得1株OsBIMK2過量表達(dá)T0代轉(zhuǎn)基因水稻植株和6株OsBIMK2沉默T0代轉(zhuǎn)基因水稻植株。
　　OsBIRH1基因編碼水稻DEAD-box RNA解旋酶，參與轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控。本研究利用水稻VIGS技術(shù)，將OsBIRH1基因沉默，離體接

4、種稻瘟病菌和剪葉接種稻白葉枯病菌后，發(fā)現(xiàn)經(jīng)沉默處理后的葉片比未經(jīng)處理的葉片的病斑大，病情指數(shù)高，由此可以初步判斷OsBIRH1具有增強(qiáng)抗病性的功能。進(jìn)而，將OsBIRH1的過量表達(dá)基因片段和沉默小片段分別克隆進(jìn)含有玉蜀黍泛素啟動(dòng)子的載體pCoU，構(gòu)建了OsBIRH1基因的過量表達(dá)載體和沉默載體。通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化入水稻，經(jīng)Hyg+/Cef+抗性篩選和PCR驗(yàn)證獲得4株OsBIRH1沉默T0代轉(zhuǎn)基因水稻植株。
　　今后，將會(huì)對