利用dsRNA體外飼喂和轉(zhuǎn)基因水稻沉默褐飛虱相關(guān)基因的研究.pdf

1、水稻是世界上一半以上人口的主食，如何提高水稻單位面積產(chǎn)量來滿足人類的需求是一個(gè)經(jīng)久不衰的課題。褐飛虱（Nilaparvata lugens Sti(a)l）屬于半翅目飛虱科昆蟲，是一種對(duì)水稻極具破壞性的單食性害蟲。褐飛虱是刺吸式口器昆蟲，它直接吸食水稻韌皮部汁液危害水稻，同時(shí)它能充當(dāng)水稻草狀叢矮病的媒介向水稻傳播這種病毒而對(duì)水稻產(chǎn)生危害。目前我國防治褐飛虱主要采用化學(xué)農(nóng)藥結(jié)合選擇抗蟲品種的策略。但是殺蟲劑的濫用使褐飛虱對(duì)其產(chǎn)生了一定的抗

2、性，并且殺蟲劑的大量使用對(duì)環(huán)境造成了嚴(yán)重的污染。對(duì)水稻進(jìn)行遺傳改良從而提高其對(duì)褐飛虱的抗性是目前研究的一大熱點(diǎn)。而植物介導(dǎo)的RNAi抗蟲在鱗翅目和鞘翅目害蟲中已有過成功報(bào)道。鑒于以上情況，本研究的目的是通過dsRNA體外喂食褐飛虱篩選出對(duì)褐飛虱有干涉效果的基因，將這些基因的干涉載體導(dǎo)入水稻，希望開拓水稻抗褐飛虱的新渠道。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用本室害蟲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫挑選出7個(gè)褐飛虱生長發(fā)育重要的基因，分別命名為ds1、d

3、s2、ds3、ds5、ds6、ds7和ds10。⑵合成了5個(gè)靶標(biāo)基因(ds1、ds2、ds3、ds6及ds10)和2個(gè)對(duì)照基因(GFP1和GFP2)的dsRNA，這些靶標(biāo)基因同源的dsRNA喂食褐飛虱后褐飛虱的死亡率較對(duì)照（喂食dsGFP）都有明顯的提高。實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)體外喂食dsRNA后的褐飛虱進(jìn)行靶標(biāo)基因表達(dá)量檢測(cè)，證實(shí)褐飛虱體內(nèi)相關(guān)同源基因的表達(dá)量都有所降低。⑶將所構(gòu)建的7個(gè)基因的干涉載體導(dǎo)入粳稻品種中花11，對(duì)轉(zhuǎn)化單株進(jìn)行