HPLC-ELSD測定茶樹可溶性糖含量及GS基因的克隆與表達.pdf

1、茶樹作為我國重要的經(jīng)濟作物,低溫引起的傷害一直是我國茶葉優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的限制因素。茶樹原產(chǎn)于熱帶及亞熱帶,抗寒力弱,而隨著我國茶區(qū)的逐漸北移和極端氣候頻繁發(fā)生,預(yù)防低溫對茶樹的傷害及選育抗寒性強的品種對茶樹穩(wěn)產(chǎn)和北方地區(qū)的引種都有較大的意義。低溫逆境中,茶樹體內(nèi)會發(fā)生一系列的生理和生化變化,而且相關(guān)受低溫調(diào)節(jié)的基因也會被誘導(dǎo)表達。
　　本研究選取“皖茶91”、“烏牛早”、“平陽特早”、“龍井43”四種茶樹為試驗材料,利用高效液相色譜-蒸

2、發(fā)光散射技術(shù)(HPLC-ELSD)對越冬期間茶樹體中主要的可溶性糖(蔗糖、棉子糖、果糖和葡萄糖)的含量進行分析。這一期間內(nèi)茶樹體內(nèi)可溶性糖含量的動態(tài)變化分析結(jié)果表明,茶樹的葉片和根系中可溶性糖含量變化一致,隨著溫度的降低,蔗糖、果糖、葡萄糖含量大幅度增加,且均在1月份達到最大值,2月開始逐漸下降。而棉子糖從11月開始被檢測到,含量隨溫度降低有所上升。因此,推測出糖含量增加幅度大的品種抗寒性較強。
　　上述試驗中,根據(jù)棉子糖含量的特

3、殊變化,進一步對調(diào)控棉子糖合成的關(guān)鍵酶---肌醇半乳糖苷合成酶(GS)及其編碼基因進行研究,將有助于從分子水平上研究糖代謝與茶樹抗寒性的關(guān)系。因此,從Genebank中獲得一條GS基因的EST片段,通過RACE技術(shù)克隆得到茶樹GS基因,命名為CsGS,其cDNA全長1321bp,開放閱讀框861bp,編碼287個氨基酸,分子量為33.34 kDa,登錄號為JQ639791。通過對CsGS基因的上游調(diào)控序列相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)該基因中含有多種低